新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)

库存 ：779

英文名 ：RNAnt RNA Extraction Kit(DNase I)

保质期 ：1个月

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

保存条件 ：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃

特别提示：包括新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)
英文名称：RNAnt RNA Extraction Kit(DNase I)
产品规格：50次

  本试剂盒适用于从多种植物中提取RNA，即便是从多糖多酚含量丰富的植物中也能成功提取高质量的RNA，如水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片、烟草叶、松针、银杏叶、杨树叶、石榴叶、冬青叶、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、枇杷、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、大豆、花生、玉米、马铃薯块茎、月季花瓣、石榴花瓣，香菇、平菇等样本。独特的裂解液配方，可使细胞中的RNA酶迅速灭活，有效去除多糖多酚对RNA提取的影响，无需*酚、*仿等试剂，同时采用硅基质膜吸附RNA进行纯化，提取的总RNA纯度高，无基因组、蛋白质和其它杂质的污染,可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR 、Northern Blot、Dot Blot、和体外翻译等多种下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RLS	40ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
过滤柱FS及收集管	50套
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)

产品特点：
1、适用范围广：可从各种植物中提取总RNA，即便是多糖多酚含量丰富的植物也能成功提取。
2、纯度高：彻底去除污染物及下游反应抑制物，提取的RNA适合于多种下游应用。
3、成功提取的样本：水稻叶片、小麦叶片、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、黄豆、花生、马铃薯块茎、松针、银杏叶、杨树叶、冬青叶、月季等样本。

RNA得率：

植物样本(100mg)	总RNA量(μg)
拟南芥荚果	～50
大豆	～55
玉米叶片	～55

实验前准备及重要注意事项：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头。
② 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
3、Buffer RLS如果产生沉淀，请加热使其溶解后室温放置。
4、Buffer RLS在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer RLS加20μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RLS室温可保存1个月。
5、第一次使用Buffer RW2前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。

操作步骤：
1、匀浆处理：取50-100mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末，加入500μl Buffer RLS(使用前请先检查是否加入β-巯基乙醇)，立即涡旋剧烈震荡混匀。
注意：对于含水量极其丰富的材料，如西瓜果肉，西红柿，梨果肉等，可以适当多加入些材料，最多可增加至200mg；对于富含淀粉的样本或成熟叶片，可适当增加Buffer RLS的用量，最多可增加至700μl。
2、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心2分钟。
3、将上清液转入已装入收集管的过滤柱中，4℃ 12000rpm离心1分钟，小心吸取收集管中的上清并转移至新的RNase-Free 离心管(自备)中，枪头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
4、缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇，混匀(此时可能会出现沉淀)，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中，若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入。4℃ 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1，4℃ 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1，4℃ 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 4℃ 12000rpm离心1 分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、4℃ 12000rpm离心2分钟。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM装入新的RNase-Free Centrifuge Tubes(1.5ml)中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-50μl RNase-Free Water，室温放置2分钟，4℃ 12000rpm离心1分钟，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
① RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
② 如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
③ 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。

储存条件：2～8℃。