产品详情
文献和实验
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库存 :314
英文名 :dT Tailing Kit
保质期 :一年
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
保存条件 :低温运输,-20℃
特别提示:包括平末端DNA加T试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:平末端DNA加T试剂盒
英文名称:dT Tailing Kit
产品规格:50次
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性,在只有dTTP存在的情况下,在平末端的DNA片段加上一个dT尾巴,主要用于制备T载体。其流程图如下:
产品特点:
1. 简单,2X Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段,包括Pfu DNA成本polymerase等酶合成的DNA片段。
3. 加T后的载体可以作为T载体使用。
产品组成:
成分 | 规格 |
Taq DNA olymerase(5U/μL) | 50μl |
2×dT Tailing Buffer | 1.25ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一:反应前纯化处理:
平末端DNA片段或平末端质粒DNA可以采取胶回收和酚/*仿抽提法等常规方法纯化,最后溶解在水或TE中,终浓度以0.1μg/μL为宜。必须注意的是,用Vent,Deep Vent,Pfu,Pwo等具有3到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段,必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/*仿抽提或Proteinase K处理),否则它们将在加T反应时,切除掉加上的T尾巴,干扰反应。
二:加T反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中,分别加入下列成分:
回收的DNA片段 | 0.2-2μg |
2×dT Tailing Buffer | 25μL |
Taq DNA polymerase(5U/μL) | 1μL |
补水到 | 50μL |
72℃保温2小时 |
三:反应后处理
加T反应后,Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合,所以必须酚/*仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/*仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于后续连接反应。
北京百奥莱博科技有限公司
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