酵母化学感受态细胞制备试剂盒

规格 ：20次

产品及特点
酵母化学感受态细胞制备试剂盒酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，高效快速制备酿酒酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品，
它具有下列特点：
1. 一次制备，-80℃保存，多次使用，免去每次转化都要制备酿酒酵母感受态细胞。
2. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要 30 分钟
3. 主要用于酿酒酵母 S. cerevisiae，也适用于其他多种实验用酵母菌株，包括
S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris 等。
4. 受体酵母可以不含质粒，也可用于携带有选择性质粒的酵母（如双杂交体系中的酵母）。
5. 对酿酒酵母，最高转化效率可达到 0.2-1×10
5个转化子/ug 质粒 DNA。对其他酵母，效率稍低，范围在 100-2000 个转化子/ug 质粒 DNA。
6. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒 DNA 进行转化，例如 YIp, YRp, YCp, YEp 和 YAC 等。
7. 可以用于酵母双杂交、定点突变（Site－Directed Mutagenesis）、基因破坏（Gene Disruption）、等位突变基因修复（Mutant Allele Recovery）等实验。
8. 本产品可以制备 20 只酵母感受态细胞（需要 200mL 酵母培养液），并还带高效转化液。 规格及成分 成 份 编 号 小纸盒包装
制备液 A 81109A 120 mL
制备液 B 81109B 6 mL
制备液 C 81109C 10 mL
转化液 A 81109D 30 mL
转化液 B 81109E 30 mL
使用手册 81109sc 1 份
自备试剂 YPD 培养基


运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。 使用方法 一：酵母化学感受态细胞的制备
说明：按本方法制备 1 管酵母化学感受态细胞就需要 OD600 达到 0.6-1.0 的新鲜酵母培养液 10 mL，用户需根据所需酵母感受态细胞的数量决定培养细胞的体积。如果超过 10 mL，则制备液的使用量需要按比例增加。
1. 挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落（4℃放置不超过 3 周的也可以），接种到装在 50mL 离心管中的 10 mL 的自备的 YPD 培养基中。
2. 30℃摇晃培养，摇床速度 250 rpm/分钟，直到 OD600 达到 0.6-1.0
（相当于 0.6-1×107细胞/mL）。
3. 室温 3000rpm 离心 5 min，弃上清得酵母细胞沉淀。
4. 新鲜制备适量的酵母感受态制备工作液。对 10 mL 酵母需要 5.25 mL的工作液，其配制方法是：将 4.75 mL 制备液 A、0.25 mL 制备液 B和0.25 mL制备液C加入到一个无菌的离心管中后充分震荡混匀即可。酵母感受态制备工作液可放室温待用。
5. 用 0.5 倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次（对 10 mL 酵母则需要 5 mL 酵母感受态制备工作液）。即混合后振荡 1 分钟，室温 3000rpm 离心 3 分钟，去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。
6. 再用 0.02 倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体（对 10 mL酵母，则需要 0.2 mL 酵母感受态制备工作液）。
7. 按每管 0.2 mL 分装到冷冻管中，放入保温冰盒中冷却半小时后再放入-80℃冰箱待用。0.2 mL 的感受态细胞足够 1 次转化使用。注意：放入保温冰盒的目的是使温度缓慢下降，急冻将使转化效率降低，这点跟大肠杆菌感受态制备过程不同。
二：化学转化酵母感受态细胞
1. 将总体积不超过 20 uL 的 0.1-5 ug 质粒 DNA 加到刚从-80℃冰箱取出的、还处于凝固状态的 0.2 mL 酵母感受态细胞上。注意：最好同时做一个不加质粒 DNA 的阴性对照组。
2. 室温充分振荡直到凝固的感受态细胞完全融化。注意：此步非常关键，如果能在恒温振荡器上 37℃振荡 5 分钟，则效果更好。
3. 加入 1.4mL 转化液 A，轻柔颠倒混匀一分钟。
4. 30℃培养 1 小时。
5. 室温 3000g 离心 5 分钟，弃上清。
6. 在酵母细胞沉淀中加 1.0 mL 转化液 B，振荡一分钟。
7. 室温 3000g 离心 5 分钟，弃上清。
8. 在酵母沉淀细胞中加入适量（如 100 uL）的转化液 B，混匀后在在选择培养基上全部涂盘。
9. 30℃培养 3-5 天后即得酵母转化菌落。
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