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文献和实验
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库存 :大量
英文名 :HotStart Taq DNA Polymerase
保质期 :-20℃恒温保存一年
供应商 :上海信裕生物科技有限公司
保存条件 :一年
规格 :250 U/250 U×5/250 U×10
HotStart Taq DNA PolymeraseHotStart Taq DNA Polymerase 是抗Taq单克隆抗体和高纯度Taq DNA聚合酶的混合制品,适用于热启动PCR。高温加热前,特异地结合在Taq酶活性区的抗体有效地抑制了DNA聚合酶的活性,从而抑制低温条件下由引物和模板DNA非特异性杂交或引物二聚体形成而导致的非特异性扩增。高温加热后,Taq抗体失活,暴露出Taq酶的活性区域,使之高效催化特异性结合的引物延伸,从而提高目的片段的产量,大大提高了PCR反应的灵敏度及特异性。使用本产品扩增得到的PCR产物3'端附有一个突出的“A”碱基,可直接用于T载体克隆。
用途
· 常规PCR扩增,提高特异性
· 实时荧光定量PCR
· 多重PCR
· TA克隆
特点
· 高特异性:抗体型热启动,确保高效的常温抑制效果
· 高度灵敏:高纯度的酶带来优良的灵敏性
· 提高产量:特异性的改善可直接提高目标产物的产量
· 操作方便:室温下配制反应体系,热循环仪无需预热
· TA克隆:产物带3'突出A碱基,可直接进行TA克隆实验
产品组分
HotStart Taq DNA polymerase (2.5 U/μl) | 100 μl |
10 x HotStart Taq Buffer | 0.65 ml |
保存条件
-20℃恒温保存一年
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃、30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制
· 以λDNA为模板,可以有效扩增8 kb的DNA片段
· 以基因组DNA为模板,可以有效扩增单拷贝基因
· 55℃反应10分钟,抗体对Taq DNA聚合酶的活性抑制效率达95%以上
· 无内切酶、外切酶污染
· PCR检测无残留宿主基因组DNA
· 室温存放一周无明显活性降低
FAQ:
Q1: 为什么常规PCR反应体系需要在冰上配制并且容易产生非特异产物或引物二聚体?
A1: 尽管Taq DNA聚合酶的最佳活性温度为70~75℃,该酶在37℃时已经开始有活性。因此在反应温度升高的过程中,Taq DNA聚合酶已开始催化非特异性结合的引物延伸,从而导致非特异性扩增和引物二聚体形成。
Q2: 常用的hotstart(热启动)技术有哪几种方法?
A2: 物理阻隔、化学修饰、抗体抑制以及对酶的序列进行改造等。
Q3: 抗体型热启动法有哪些优势?
A3: 抗体型热启动法既克服了物理阻隔法导致的因PCR前几个循环混合不均匀而降低产量的问题,也不必像化学修饰法那样延长初始变性时间,无需改变PCR仪的设置,使用起来非常方便。
应用实例
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