产品详情
文献和实验
相关推荐
保存条件 :零下80度
保质期 :1年
英文名 :XL1-BlueChemically Competent Cell
库存 :1000只
供应商 :上海淳麦
规格 :20*100ul
AGL1农杆菌电转感受态细胞
AGL1 Electroporation-Competent Cell
产品编码: 保存条件: -80℃
产品规格:
AGL1 | 20×50μl |
pCAMBIA2301(control vector) | 10ng/ul 10ul |
AGL1农杆菌电转感受态细胞基因型:
C58 RecA (rif R/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA (strepR) Succinamopine
AGL1农杆菌电转感受态细胞简要说明:
AGL1菌株为C58, RecA型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-DNA,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件, pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。
pTiBo542DT-DNA型Ti质粒含有筛选标签:strep,赋予AGL1菌株链霉素抗性,适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作,开发的AGL1电转感受态特别适用于大质粒的转化:经pCAMBIA2301质粒(size:11633bp)检测转化效率可达5×104 cfu/μg;经pCAMBIA2301-ZH质粒(size:40kd)检测转化效率可达5×103cfu/μg。
AGL1农杆菌电转感受态细胞操作说明:
1. 0.2cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
- 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入1-5ug质粒DNA(质粒体积不大于6ul,最好用试剂盒抽提,双蒸水溶解),用手拨打管底混匀,立即插入冰中,用200ul枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。
- 启动电转仪,设置参数:C=25uF,PC=200ohm,V=2400V(此参数为Biorad 推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中,加入700ul 无抗生素的LB并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50ug/ml kan 时,28℃培养48h即可;平板中同时加入50ug/ml kan,20ug/ml rif 时,需28℃培养60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h)。
其他推荐:
上海淳麦生物科技有限公司专注于感受态细胞、质粒、载体、农杆菌、酵母等生命科学领域的产品研发和技术服务支持。
上海淳麦生物科技有限公司在感受态细胞的研发方面,实力雄厚,拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类,共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面,拥有了大肠杆菌和农杆菌电击感受态种类,极大提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。
上海淳麦生物科技有限公司
实名认证
钻石会员
入驻年限:7年