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啥是外泌体?外泌体(Exosome)是一种由活细胞分泌的圆形(dish)或杯状(cup)脂质双分子层膜微小囊泡,直径约30-100nm,可由各种类型的细胞分泌,广泛存在于血液、尿液、唾液、滑膜液、乳汁、脑脊液、眼泪、腹水、羊水等各种体液以及细胞培养上清中。外泌体是一种活性复合体,包含复杂的蛋白质,核酸和脂质。
外泌体分离纯化方法
方法 | 优点 | 缺点 |
差速离心法 | 分离纯化后纯度高 | 费时费力,产量低,回收率不稳定 |
蔗糖密度离心法 | 分离纯化后纯度高 | 费时费力,产量低,硬件要求高(需超速离心机),对离心时间敏感 |
超滤离心法 | 操作简便高效,不影响外泌体活性 | 成本高,需要的样本起始量大 |
试剂盒法 | 效率高,对硬件要求低 | 杂蛋白多,纯度低,回收产物可能不兼容下游实验 |
外泌体鉴定方法
NTA鉴定 纳米颗粒跟踪分析(Nanopraticle Tracking Analysis, NTA)技术可以对10-2000nm范围内的纳米颗粒进行快速实时动态检测,测量参数包括颗粒粒径、散射光强、浓度等,可对外泌体进行粒径大小及数量进行统计并做出初步质量评估。
电镜鉴定 通过负染的方法,在电镜下直接观察单个外泌体的形态结构与大小,如下图。该鉴定基于透射电镜平台,仪器需要专业的技术人员进行操作。
外泌体研究案例
外泌体来源广泛,可从不用类型的样本中提取外泌体。通用型的外泌体研究方法见下图。
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