β－葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase，β-GD）试剂盒说明书

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供应商 ：青岛捷世康

规格 ：50 管/48 样

β－葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase，β-GD）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
β-GD 广泛存在于动物组织中，是一种参与肿瘤侵袭和转移过程的基质降解酶，具有水解固
醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。该酶在肝细胞中含量较高。此外在胃癌组织中含量
丰富，测定胃液β-GD 活性对于研究胃癌具有重要的意义。
测定原理
β-GD 催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸产生游离的酚酞，通过测定苯酚含量反应该酶活性高低。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸
馏水。
试剂的组成和配制
提取液：液体60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入5mL 蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂仍
-20℃保存；
试剂三：液体37.5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：1μmol/mL 标准储备液10mL，4℃保存；
样品测定的前处理
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL
提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP 管中加入下列试剂）
试剂名称（μL） 加样孔
测定管 标准管 空白管
试剂一 100 100 100
试剂二 100 100 100
样本 50
1μmol/mL 标准液 50
蒸馏水 50
混匀后，37℃水浴30min
试剂三 750 750 750
混匀， 540nm 下测定各管吸光值
注意：标准管和空白管只需测一次。
β-GD活性计算
（1）按样本鲜重计算：
单位定义：每小时每g 鲜重样品中催化产生 1μmol 酚酞的量为一个活力单位。
β-GD（μmol/h/g 鲜重）= (C 标准管×V1)×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）
÷(W×V1÷V2)÷T=2×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每小时每mg 组织蛋白催化产生 1μmol 酚酞的量为一个活力单位。
β-GD（μmol/h /mg prot）= (C 标准管×V1)×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）
÷(V1×Cpr)÷T=2×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr
C 标准管：标准管浓度， 1μmol/mL；V1：加入样本体积：0.05mL；V2：加入提取液体积，
1mL；T：反应时间，0.5h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。