产品详情
文献和实验
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规格 :450ml
杭州客户,首次购买,可上门指导操作!产品简介
该试剂盒采用磁珠纯化方式,适用于高通量测序文库(NGS)构建中DNA片段大小快速分选和回收。DNA片段筛选试剂盒的结合缓冲液中含有超顺磁珠,根据磁珠悬浮液和样品的体积比可选择性结合DNA片段。经过磁性分离和乙醇清洗,低盐洗脱缓冲液或无核酸酶水洗脱的高纯度的DNA片段不含有核苷酸,引物,接头,酶和盐等污染物,可被直接用于下游应用,比如:酶切、测序、杂交、PCR反应等后续操作。可应用于手动或自动液体操作设备。产品优势
1. 适合DNA的片段范围广:100 bp~50 kb;2. 回收率高:回收率高达80%以上;
3. DNA纯度高:回收的PCR产物纯度高;
4. 操作快速简单:20 min即可完成整个操作流程,无需离心;
5. 可适用于自动化、高通量PCR产物纯化。
6. 该试剂盒使用步骤和国外beckman Ampure XP高度一致,直接替换
7. 价格低,订货期短等明显优势。
产品原理
图1(核酸纯化试剂盒大致工作原理)
自备仪器和试剂
1.磁力架2.洗涤液:80%乙醇水溶液。
3.洗脱液:Buffer EB(10mM Tris-HCl,pH 8.0);或者RNase-Free Water。
操作步骤
DNA 片段分选(两步法,第一步:1.2X。第二步:0.56X。)1,各取80uL 的DNA 样品加入到EP 管内,各加入96 ul 的磁珠,吹吸混匀,室温静止5min;磁力架上静止5min;
2,移取上清液至新的1.5 ml 的EP 管内,并各加入45 ul 的磁珠,吹吸混匀,室温静止5min;磁力架上静止5min,去上清;
3,用80%乙醇洗涤磁珠两遍,并晾干;
4,用25 ul H2O 洗脱,转移出15 ul 液体用于2100 检测;
性能实例:
1.核酸片段筛选测试:
测试目的:通过DNA片段筛选测试自主研发试剂盒与国外进口试剂盒性能差异
1)测试平台:安捷伦2100生物分析仪
2)实验方法:将大片段DNA打断后添加磁珠纯化试剂盒进行片段筛选,运用两步法对样品进行核酸片段筛选回收
图2如下:
图2,安捷伦2100生物分析仪片段选择对比测试结果:自主研发试剂盒与国际商品化品牌Ampure XP 试剂盒核酸片段回收对比(左图为Ampure XP品牌核酸纯化试剂盒安捷伦2100生物分析仪检测回收核酸平均片段大小,平均片段大小为265;右图为自主研发核酸纯化试剂盒利用安捷伦2100生物分析仪检测回收核酸平均片段大小,平均片段大小为265;)对比结果十分接近。
2. DNA回收效率测试
测试目的:检测对DNA片段的回收效率
实验方案:大片段DNA打断后,经试剂盒一步法纯化后(1.8X)测试DNA回收效率
表3如下:
测试品牌 | DNA总投入量 | 纯化后DNA回收效率(%) |
Ampure XP-1 | 5ug | 84.20% |
Ampure XP-2 | 5ug | 83.87% |
自主研发试剂盒-1 | 5ug | 84.40% |
自主研发试剂盒-2 | 5ug | 84.12% |
3.分选DNA片段推荐试用比例
文库平均长度(插入片段+接头+引物) | 300bp | 350bp | 400bp | 500bp | 600bp | 700bp |
第一次分选磁珠体积 | 0.8倍 | 0.7倍 | 0.6倍 | 0.55倍 | 0.5倍 | 0.45倍 |
第二次分选磁珠体积 | 0.2倍 | 0.2倍 | 0.2倍 | 0.15倍 | 0.15倍 | 0.15倍 |
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