BTN130551型单细胞RNA扩增试剂盒北京厂家现货

库存 ：415

英文名 ：Single Cell RNA Amplification Kit

保质期 ：一年

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

保存条件 ：低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用方法：强烈建议首次使用本产品前，先预实验，用纯化好的任何总RNA 10倍系列稀释，直到浓度为25pg/μL，然后用0.4μL(即10pg RNA，相当于单个细胞的总RNA量)按本操作说明书进行扩增，一次需平行做4-10个重复。下列步骤仅用于制备mRNA，如果需要制备aRNA(cRNA)，则需要把P1和P2引物对换，其他成分不需要做任何改动。一：新鲜准备工作液见手册左侧各表，据此配制的的各工作液足够扩增10个单细胞用。如果一次实验没有10个细胞，工作液的量仍需按10个细胞的用量新鲜配制，冰上放置时间不能超过1小时。二：准备单细胞悬液如何制备单个细胞取决于实验样品和所能使用的仪器设备，此处所列步骤仅供分离单个培养细胞的参考，本试剂盒不提供相关试剂。对其他材料(如干细胞克隆、2-8细胞胚胎、胚囊、胚胎组织等)用户需自行选用合适的制备单细胞的方法。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞(如FACS分离细胞、卵细胞等)，则可以跳过此步直接进入下步操作)：1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于培养基中并计数。2.转移100-4000个细胞到离心管中，400g离心4分钟，弃上清。3. 将细胞沉淀重悬于50μL自备PBS中，使其终浓度为2-80个细胞/μL，所得细胞悬液可直接用于下面的反应。本方法一个管中可以处理1-40个细胞，但这些细胞必须是先分离成独立细胞的，不能是未分离的细胞团。三：cDNA 合成和PCR扩增4. 标记10个0.5mL PCR管(10 号设为阴性对照)，按下表加入各成分：<table width=650 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:left;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>成分<td>1-10 号样品管<tr><td>RT工作液(按下表1 配)<td>每管加4.0μL，共10管<tr><td>细胞样品(来于第3 步)或10pg-10ng/μL纯化的RNA<td>1-19号加0.5μL样品(1-40个细胞)，10号用0.5μL水代替<tr><td colspan=2>·70℃水浴90秒，转冰上放置1分，短暂离心<tr><td>溶液C(试剂盒提供)<td>每管加0.5μL，共10管<tr><td colspan=2>·总反应体系为5μL，37℃水浴90m，70℃水浴10m，冰上放置1分钟，短暂离心<tr><td>Tailing预处理液(按下表2 配)<td>每管加1μL，共10管<tr><td colspan=2>·短暂离心后PCR 仪上37℃ 30m，再80℃ 25m，离心后放冰上1m<tr><td>Tailing工作液(按下表3配)<td>每管加6μL，共10管<tr><td colspan=2>·短暂离心后37℃15分钟，70℃10分钟，放冰上1分钟<tr><td colspan=2>·上步反应管中每个取3μL分别加入2个新PCR管做模板，共分得20个PCR管。每个反应管中剩约6μL，作未PCR对照放-20℃待用。<tr><td>引物+水混合液(按下表4 配)<td>每个PCR管加12μL，共20管<tr><td>PCR Mix 3.0<td>每管加15μL，共20管<tr><td colspan=2>·按(95℃3分，50℃2分，72℃3分)参数循环1次，冰上放1分<tr><td>P2<td>每管加1.5μL，共20管<tr><td>自备PCR级石蜡油<td>若PCR 仪无热盖，则每管加50μL<tr><td colspan=2>·(95℃30秒，67℃1分，72℃3分，每次循环后在72℃的时间增加6秒)循环20次，4℃放置</table>5. 将模板来于一个样的2 管PCR产物汇集，20 管汇集后将得10 管(对应于10个样)，每管30μL。只有循环数在24次以上时电泳才能检测到PCR产物，故此步不需要电泳检测。6. 用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，去除残留的引物，50μl 洗脱DNA，产物放-80C 长期保存。7. 10个样和其对应的未PCR 对照(共20个样)各取0.5μL 为模板进行PCR或定量PCR分析，判断靶基因在哪个样品中得到了扩增和扩增效率如何。没有靶基因的可以选择看家基因。客户需自备相关引物和试剂。四：制备含T7启动子的模板(下列操作只针对10个样品中的一个)8. 选一个靶基因得到扩增的DNA样品(第6 步回收所得)，各取1μl 加到10个PCR 管中，各加29μl 新鲜配制的PCR Mix(按下表5 配)，混匀后按以下参数扩增1次(95℃ 5m30s，64℃ 1m，72℃ 5m18s)，再按以下参数扩增8次(95℃ 30秒，67℃ 1m，72℃ 5m18s，每次循环后将72℃延伸时间增加6秒)，PCR结束后在72℃

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")BTN130551型单细胞RNA扩增试剂盒北京厂家现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应BTN130551型单细胞RNA扩增试剂盒北京厂家现货，产品信息：

类别：克隆与表达

英文名：Single Cell RNA Amplification Kit

产品名	产品编号	包装规格
单细胞RNA扩增试剂盒	BTN130551	80次

编号：BTN130551

规格：80次

英文名：Single Cell RNA Amplification Kit

品牌：百奥莱博

产地：北京

一个哺乳动物单细胞一般只有约10pg的总RNA，其中的mRNA 只有1-5%(约10E5-10E6个分子),因此直接用单细胞进行mRNA扩增具有极大的技术难度。本公司进过精心研究，整合最新技术，开发出了可以直接用单个细胞进行mRNA扩增的试剂盒，其原理如下(仅以扩增mRNA 链为例)：

 

产品特点：

1. 双向，既可用于制备正义的mRNA，也可用于制备反义的aRNA(antisense RNA)或cRNA(complimenary RNA)。

2. 直接用单细胞裂解液进行反应，免RNA提取，整个过程只需要半天。

3.适用于多种单细胞，包括卵细胞、干细胞、FACS分离细胞等单细胞，还可用于培养细胞和胚胎等实体租组织(需要单细胞化)，也可以使用10pg-10ng 纯化的总RNA作为模板。

4. 假阴性和假阳性率均小于6%，RNA扩增成功率为90%。

5. 所得mRNA或aRNA(cRNA)可以直接用于后续的RT-PCR、芯片杂交、表达谱分析等实验。

6. 本试剂盒足够对80个单细胞进行单细胞RNA扩增。

 

 

成分	规格
P1(cDNA一链合成引物)	360μl
P2(cDNA 二链合成引物)	360μl
P3(T7-cDNA 二链合成引物)	100μl
溶液A(4×细胞裂解液)	100μl
溶液B(RI)	10μl
溶液C(逆转录酶)	40μl
溶液D	10μl
溶液E	10μl
溶液F	150μl
溶液G(TdT)	60μl
超纯水	10μl
PCR 3.0	9ml
转录预配液，2×	500μl
T7 RNA聚合酶	50μl
说明书	1份

 

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

 

使用方法：

强烈建议首次使用本产品前，先预实验，用纯化好的任何总RNA 10倍系列稀释，直到浓度为25pg/μL，然后用0.4μL(即10pg RNA，相当于单个细胞的总RNA量)按本操作说明书进行扩增，一次需平行做4-10个重复。

下列步骤仅用于制备mRNA，如果需要制备aRNA(cRNA)，则需要把P1和P2引物对换，其他成分不需要做任何改动。

 

一：新鲜准备工作液

见手册左侧各表，据此配制的的各工作液足够扩增10个单细胞用。如果一次实验没有10个细胞，工作液的量仍需按10个细胞的用量新鲜配制，冰上放置时间不能超过1小时。

 

二：准备单细胞悬液

如何制备单个细胞取决于实验样品和所能使用的仪器设备，此处所列步骤仅供分离单个培养细胞的参考，本试剂盒不提供相关试剂。对其他材料(如干细胞克隆、2-8细胞胚胎、胚囊、胚胎组织等)用户需自行选用合适的制备单细胞的方法。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞(如FACS分离细胞、卵细胞等)，则可以跳过此步直接进入下步操作)：

1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于培养基中并计数。

2.转移100-4000个细胞到离心管中，400g离心4分钟，弃上清。

3. 将细胞沉淀重悬于50μL自备PBS中，使其终浓度为2-80个细胞/μL，所得细胞悬液可直接用于下面的反应。本方法一个管中可以处理1-40个细胞，但这些细胞必须是先分离成独立细胞的，不能是未分离的细胞团。

 

三：cDNA 合成和PCR扩增

4. 标记10个0.5mL PCR管(10 号设为阴性对照)，按下表加入各成分：

 

成分	1-10 号样品管
RT工作液(按下表1 配)	每管加4.0μL，共10管
细胞样品(来于第3 步)或10pg-10ng/μL纯化的RNA	1-19号加0.5μL样品(1-40个细胞)，10号用0.5μL水代替
·70℃水浴90秒，转冰上放置1分，短暂离心
溶液C(试剂盒提供)	每管加0.5μL，共10管
·总反应体系为5μL，37℃水浴90m，70℃水浴10m，冰上放置1分钟，短暂离心
Tailing预处理液(按下表2 配)	每管加1μL，共10管
·短暂离心后PCR 仪上37℃ 30m，再80℃ 25m，离心后放冰上1m
Tailing工作液(按下表3配)	每管加6μL，共10管
·短暂离心后37℃15分钟，70℃10分钟，放冰上1分钟
·上步反应管中每个取3μL分别加入2个新PCR管做模板，共分得20个PCR管。每个反应管中剩约6μL，作未PCR对照放-20℃待用。
引物+水混合液(按下表4 配)	每个PCR管加12μL，共20管
PCR Mix 3.0	每管加15μL，共20管
·按(95℃3分，50℃2分，72℃3分)参数循环1次，冰上放1分
P2	每管加1.5μL，共20管
自备PCR级石蜡油	若PCR 仪无热盖，则每管加50μL
·(95℃30秒，67℃1分，72℃3分，每次循环后在72℃的时间增加6秒)循环20次，4℃放置

5. 将模板来于一个样的2 管PCR产物汇集，20 管汇集后将得10 管(对应于10个样)，每管30μL。只有循环数在24次以上时电泳才能检测到PCR产物，故此步不需要电泳检测。

6. 用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，去除残留的引物，50μl 洗脱DNA，产物放-80C 长期保存。

7. 10个样和其对应的未PCR 对照(共20个样)各取0.5μL 为模板进行PCR或定量PCR分析，判断靶基因在哪个样品中得到了扩增和扩增效率如何。没有靶基因的可以选择看家基因。客户需自备相关引物和试剂。

 

四：制备含T7启动子的模板(下列操作只针对10个样品中的一个)

8. 选一个靶基因得到扩增的DNA样品(第6 步回收所得)，各取1μl 加到10个PCR 管中，各加29μl 新鲜配制的PCR Mix(按下表5 配)，混匀后按以下参数扩增1次(95℃ 5m30s，64℃ 1m，72℃ 5m18s)，再按以下参数扩增8次(95℃ 30秒，67℃ 1m，72℃ 5m18s，每次循环后将72℃延伸时间增加6秒)，PCR结束后在72℃保温10m。

9. 汇集10 管PCR反应液(共300μl)，用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，30μl 洗脱。

10. 将30μL洗脱DNA全部上样到琼脂糖胶上进行电泳(只要电泳10分钟即可，否则胶体积太大，回收效率低)，360nm紫外灯下切胶(250bp以上区域)，最后用30-50μL 洗脱。此步所得PCR片段无250bp以下的非特异扩增产物，可直接用于后续体外转录。

 

五：T7 体外转录：请按该试剂盒的使用说明书操作(本产品含体外转录试剂)。

 

表1:RT工作液

 

成分	用量
超纯水	30.8μl
溶液A	11μl
溶液B	1.1μl
P1稀	1.1μl
合计	44μl

注：P1 稀是将1μl P1加入到100μL超纯水新鲜配制后得到，需新鲜配制。用户可在此步加入自备的内参，但超纯水的用量要相应减少。如加入2μL内参，则少加2μL 水。

 

表2:Tailing预处理液

 

成分	用量
超纯水	8.8μl
溶液D	1.1μl
溶液E	1.1μl
合计	11μl

 

表3:Tailing工作液

 

成分	用量
超纯水	42.9μl
溶液F	16.5μl
溶液G	6.6μl
合计	66μl

 

表4:引物+水混合液

 

成分	用量
超纯水	231μl
P1	33μl
合计	254μl

 

表5:PCR Mix

 

成分	用量
超纯水	132μl
P1	11μl
P3	11μl
PCR 3	165μl
合计	319μl

BTN130551型单细胞RNA扩增试剂盒北京厂家现货专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：单细胞RNA扩增试剂盒,BTN130551,Single Cell RNA Amplification Kit

我公司是一家生物高新技术企业，主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销*(代"售")。并代理销*(代"售")Omega、Sigma、R&D、GBD、ATCC、HYCLONE等二十多家国外知名品牌，致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务，满足生物化学、分子生物学 、单细胞RNA扩增试剂盒、细胞生物学、免疫学 ELISA试剂盒等生物科技实验需求。

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