人白介素4(IL-4)Elisa试剂盒

库存 ：大量

供应商 ：上海彩佑实业有限公司

检测限 ：6个月

检测方法 ：ELISA

应用 ：仅供科研

适应物种 ：人

标记物 ：人

样本 ：血清

规格 ：48T/96T

试剂准备
a、使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。
b、本试剂盒可以直接加样，如浓度过高，可以进行适当比例的稀释，计算时应将结果乘以稀释的倍数（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。
c、洗涤液为25倍浓缩液，使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中，用双蒸水定容到500ml即为工作液。
d、标准品的稀释：先用标准品/样品稀释液浆标准品冻干粉定容到150μl，然后漩涡混匀30秒即为标准品原液(24小时内用完)。取5支干净的Eppendorf管，每管加150μl的标准品稀释液，分别标记上32ng/ml，16ng/ml，8ng/ml，4ng/ml，2ng/ml。取150μl标准品原液加入标记32ng/ml 的管中，混匀后同样取出150μl，加入下一管，以此类推直至最后一管。] （见下图）
零孔：直接加标准品/样品稀释液。

原液64ng/ml      32ng/ml     16ng/ml     8ng/ml      4ng/ml      2ng/ml
e、生物素抗原的稀释：低速离心，然后抽取生物素抗原稀释液1ml到浓缩型生物素抗原中，漩涡混匀15秒，至冻干粉完全溶解，然后将所有液体倒入稀释液瓶中，漩涡混匀后即为生物素抗原工作液(一周内用完)。
f、亲和素-HRP的稀释：低速离心，使浓缩液全部沉到管底，将浓缩亲和素-HRP全部转移到稀释液瓶中，漩涡混匀后即为亲和素-HRP工作液(一周内用完)。
6、样本前处理
a、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
b、血清：室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
c、血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
d、尿液：用无菌管收集，2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
e、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS (PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
f、组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
7、洗板方法
a、手工洗板：先洗去酶标孔中的的液体，在吸水纸上拍干，然后每孔加入300μl稀释好的洗涤液，轻轻摇晃30秒，然后甩掉，在吸水纸上拍干，重复4-5次。
b、洗板机洗板：洗板机洗板比较便捷，但应操作熟练后使用。
8、详细操作程序
a、使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
b、空白孔不加样，只加显色剂A，B和终止液用于调零。
c、标准品孔：每孔加入稀释好的标准品50μl，零孔加入标准品/样品稀释液50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
d、样品孔：加入样品50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
e、轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
f、将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
g、第一次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
h、加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中，轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
i、第二次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干