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文献和实验
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库存 :大量
供应商 :上海雅吉生物
检测限 :6个月
检测方法 :酶联免疫
适应物种 :人
标记物 :见说明书
样本 :血清、血浆–组织匀浆–腹水–细胞、培养上清
规格 :48次/96次
人食欲素受体(OXR)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中食欲素受体(OXR)的含量。 实验原理
本试剂盒应用间接法测定标本中人食欲素受体(OXR)水平。用纯化的人食欲素受体
(OXR)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的食欲素受体(OXR)标准品和未知浓度的食欲素受体(OXR)待检样品,温育后,加入生物素标记的抗 IgG 抗体,再与链霉亲和素-HRP 结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。
TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的食欲素受体(OXR)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人食欲素受体(OXR)浓度。
试剂盒组成
1 | 30 倍浓缩洗涤液 | 20ml×1 瓶 | 8 |
标准品 S1(12ng/L) | 0.5ml×1 瓶 |
2 | 链霉亲和素-HRP | 6ml×1 瓶 | 标准品 S2(6ng/L) | 0.5ml×1 瓶 | |
3 | 酶标包被板 | 12 孔×8 条 | 标准品 S3(3ng/L) | 0.5ml×1 瓶 | |
4 | 生物素标记的抗-IgG 抗体 | 6ml×1 瓶 | 标准品 S4(1.5ng/L ) | 0.5ml×1 瓶 | |
5 | 显色剂 A 液 | 6ml×1 瓶 | 标准品 S5(0.75ng/L) | 0.5ml×1 瓶 | |
6 | 显色剂 B 液 | 6ml×1/瓶 | 9 | 说明书 | 1 份 |
7 | 终止液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 封板膜 | 2 张 |
标本要求
- 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
- 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
操作步骤
- 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复 孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
- 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品 50μl,在样本反应孔中加入 50 微升样本,盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育 45 分钟。
- 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
- 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 4 次,拍干。
- 加生物素标记的抗-IgG 抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG 抗体 50μl。37℃温育 30 分钟
- 洗涤:操作同 4。
- 加链霉亲和素-HRP:每孔加入 50μl 的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育 30
分钟。
- 洗涤:操作同 4。
- 显色:每孔先加入显色剂 A 50μl,再加入显色剂 B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
- 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
- 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。
注意事项
- 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
- 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
- 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
- 如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先将样本稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数(×5×n)。
- 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
- 本试剂不同批号组分不得混用。显色剂 B 请避光保存。
- 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
- 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 线性范围:
规格:
96 人份/盒保存条件及有效期
- 试剂盒保存:;2-8℃。
- 有效期:6 个月
上海雅吉生物科技有限公司
品牌商实名认证
皇冠会员
入驻年限:8年