产品详情
文献和实验
相关推荐
库存 :大量
英文名 :T4 RNA Ligase 1
CAS号 :点击查看
保质期 :有效期1个月
供应商 :翌圣生物科技(上海)股份有限公司
保存条件 :-25~-15℃保存
规格 :1000U
产品简介T4 RNA Ligase 1,即T4 RNA连接酶1,是一种ATP-依赖的可催化单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键的酶。T4 RNA Ligase 1可进行RNA之间的连接(效率最高),单链DNA与单链RNA之间的连接(效率不高),也可用于单链DNA之间的连接(效率很低)。适用于单链RNA分子的连接、NGS中miRNA文库构建的 5'端接头连接。产品信息
货号 | 14651ES80/ 14651ES90 |
规格 | 1,000 U / 5,000 U |
单位定义 | 在37℃条件下,30分钟内将1 nmol 的5 -[32P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量定义为1 U。 |
来源 | 大肠杆菌表达的来源为T4嗜菌体的重组蛋白 |
推荐反应条件 | 10×T4 RL1 Reaction Buffer:500 mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25℃),100 mM MgCl2,20 mM DTT;最适37℃孵育。 |
失活条件 | 65℃加热15 min或煮沸2 min可使T4 RNA Ligase 1失活/加入终浓度50 mM EDTA pH 8.0可使T4 RNA Ligase 1反应终止。 |
组分编号 | 组分名称 | 14651ES80 | 14651ES90 |
14651-A | T4 RNA Ligase 1 (10 U/μL) | 100 μL | 500 μL |
14651-B | 10×T4 RL1 Reaction Buffer | 200 μL | 1 mL |
储存条件-25~-15℃保存,有效期2年。
使用说明1. 单链RNA的环化连接反应参考下表在冰浴中配制如下反应体系
组分 | 使用量(μL) |
10×T4 RL1 Reaction Buffer | 2 |
1 mM ATP | 1 |
单链RNA (20 μM) | 0.5 |
PEG-8000 (50%) | 8 |
T4 RNA Ligase 1 (10 U/μL) | 1 |
DEPC水 | Up to 20 |
组分 | 使用量(μL) |
10×T4 RL1 Reaction Buffer | 2 |
10 mM ATP | 2 |
单链RNA (10 μM) | 2 |
单链DNA (10 μM) | 2 |
PEG-8000 (50%) | 8 |
T4 RNA Ligase 1 | 2 |
DEPC水 | Up to 20 |
*如果发现效果欠佳可以适当延长连接反应时间或尝试25℃孵育2 h或16℃孵育16 h。
4. 终止反应:65℃孵育15 min或煮沸2 min,即可终止反应。
注意事项1. 本品连接的底物无论是单链RNA还是单链DNA,都需要确保5'末端磷酸化或腺苷酰化,同时3'末端是羟基。
2. 可根据具体应用选择合适的操作方法,需准备额外的试剂,如RNase inhibitor、DEPC水等。
3. 根据连接反应的类型,推荐在反应体系中加入适量的PEG-8000。建议连接单链RNA或DNA的分之间连接反应体系中PEG-8000的终浓度为15%-25%,这样可以显著提高酶活性,同时不影响反应特性。
4. 本产品仅用作科研用途。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230419
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
品牌商实名认证
钻石会员
入驻年限:17年