HEPG2.2.15表达HBV病毒的人肝细胞

库存 ： T25/瓶

组织来源 ：见名称

物种来源 ：人，大小鼠

细胞形态 ：正常

器官来源 ：见说明书

运输方式 ：常温

年限 ：永生代细胞

生长状态 ：贴壁或悬浮

规格 ：1X10^6 cells

培养操作及注意事项说明


一．产品简介

1、细胞名称：HEPG2.2.15；表达HBV病毒的人肝细胞

2、生长特性：    □ 贴壁   □ 悬浮   □半悬浮半贴壁

3、细胞生长条件：

培养条件	MEM+10%FBS+480ng/mlG418
温度	37℃
空气条件	5% CO2，,95% AIR
传代方法	1:2传代，2~3天换液
冻存条件	90%FBS+10%DMSO

4、背景资料：HepG2.2.15是抗HBV新药开发的一个良好的体外研究工具。该细胞株是用2个头尾相连的HBV-DNA全基因的重组质粒转染受体细胞HepG2而成，可在体外无性繁殖，能够长期稳定的向培养上清中分泌HBsAg, HBeAg和完整的Dane颗粒，而且还能产生大量的复制中间体，是体外筛选抗HBV药物的良好模型。
二．使用方法
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm²培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm²培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO₂细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm²培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm²培养瓶，于37℃，5%CO₂细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。