人雌激素受体相关受体α(ERRa)免疫组化试剂盒

人雌激素受体相关受体α(ERRa)免疫组化试剂盒

价格: ¥1690 - 2890

品牌:KA&M-BIO

货号:(IM)(01)-2948

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库存 :17

供应商 :圻明

检测限 :详见说明

检测方法 :免疫组织化学

应用 :病理学研究

适应物种 :人大小鼠兔牛

标记物 :HRP-SA

样本 :组织

规格 :50T-100T

人雌激素受体相关受体α(ERRa)免疫组化试剂盒产品规格:50T/100T圻明生物现货供应。产品仅供科研实验,不用于临床诊断依据。
免疫组织化学技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂,如酶、金属离子、同位素等,显示一定的颜色。借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化,从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的一门新兴组化技术。


在病理学研究中,免疫组化技术的作用和意义颇为重要。免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到普遍认可,其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,准确率可达50-75%。

组织的固定:病理学研究和免疫组化实验中,组织的固定是非常重要的一步。将目的组织放于某些化学试剂中,使组织中的细胞物质接近于具有生命功能时的结构和形态称为固定。组织固定还要减少外源性和内源性分解酶的作用,防止细胞自溶等,从而保持组织和细胞内的抗原性,使抗原不失活。

人雌激素受体相关受体α(ERRa)免疫组化试剂盒组织固定步骤
1.从动物体内取出相应组织,放入4%多聚甲醛,此时4%多聚甲醛混有血等杂质,将该组织放入一杯新鲜的4%多聚甲醛中,如此再三,操作三次后,用保鲜膜封闭固定皿后室温孵育5分钟,将其放于4℃冰箱,过夜孵育。
2.次日,去掉4%多聚甲醛,将该组织放入新鲜的0.1MPBS中孵育30分钟后,将该组织放入新鲜的0.1MPBS中孵育30分钟。
3.弃掉PBS,将该组织放入70%的乙醇中,孵育1小时。
4.弃掉70%乙醇,将该组织放入80%的乙醇中,孵育1小时。
5.弃掉80%乙醇,将该组织放入90%的乙醇中,孵育1小时。
6.弃掉90%乙醇,将该组织放入95%的乙醇中,孵育1小时。
7.弃掉95%乙醇,将该组织放入100%的乙醇中,孵育1小时。
8.弃掉100%乙醇,将该组织放入100%的乙醇中,孵育1小时。
9.弃掉100%乙醇,将该组织放入100%的乙醇中,孵育1小时。
10.弃掉100%乙醇,将该组织放入二甲苯中,透明30分钟。
11.弃掉二甲苯,将该组织再次放入新鲜二甲苯中,透明30分钟。
12.弃掉二甲苯,将该组织放入热熔的石蜡中,包埋该组织。
13.待热熔的石蜡凝固,即可取出包埋块,备用或者切片。

注意事项:
1.固定组织时,必须有足够的固定液,一般为组织体积的10-15倍。
2.固定组织要新鲜,组织取材后立即固定。
3.组织块的体积应该小而薄,一般免疫组化组织大小为1.0㎝×1.0㎝×1.0㎝×0.2㎝。
4.固定效果随温度升高而加强,一般在-70℃~30℃之间。
5.10%中性甲醛和4%多聚甲醛适合于固定,37℃或者常温固定,适合于许多蛋白质、抗原,能保持其与抗体的反应能力。
6.组织越大,固定时间越长。固定时间与温度成反比,以实际情况为准。

人雌激素受体相关受体α(ERRa)免疫组化试剂盒石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤(建议方案):
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤(建议方案):
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr;
2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温
度达到 98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附 1)* 注:有些抗原勿需修复,
直接进入第 5 步封闭。
5.封闭: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用试剂 C(即用型一抗),37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜;
7.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
8.封闭: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂 D),37℃湿盒中孵育
30 min;
10.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
11.封闭: 滴加试剂 Tween 20,37℃湿盒孵育封闭 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用抗体稀释液稀释的试剂 E(1:50~200,终浓度 5~20 nM),
37℃湿盒中孵育 30 min;
13.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min),TBS 洗涤(2×5 min);
14.显色:应用 DAB 溶液(试剂 F)显色;
15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;
16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;
17.观察成像: 显微镜下观察成像。

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