原代大鼠肝细胞

原代大鼠肝细胞

价格: ¥3500

品牌:TOPBIOTECH

货号:TOPCP0005

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产品详情

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细胞类型 :原代细胞

供应商 :拓普生物

库存 :1×106个

英文名 :Primary rat hepatocytes

生长状态 :贴壁生长

运输方式 :干冰运输(1 Vial)或活细胞运输(T-25 flasks)

器官来源 :

是否是肿瘤细胞 :

细胞形态 :上皮细胞样或梭形

物种来源 :大鼠

组织来源 :

产品简介
TopBiotech提供的原代大鼠肝细胞取自新鲜组织,按照标准操作流程分离培养。自主研发的原代大鼠肝细胞完全培养基(货号:TOPM0005)能提供细胞最佳的生长条件,降低杂细胞污染,保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时,TopBiotech还建立了严格的细胞鉴定流程,所提供的原代细胞均需要细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测来保证细胞纯度;同时也需要经过微生物检测,保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其它类型的细菌和病毒。


运输保存
采用干冰保存运输。 收到细胞时, 若干冰已经完全融化, 请立即将细胞复苏培养; 若尚
留有干冰, 请立即将细胞放入液氮中保存待用, 请按指定条件贮存细胞, 切不可将细胞置于
高温环境。


实验操作
一、 细胞复苏
1. 将水浴锅预热至 37℃。
2. 用 75%酒精擦拭紫外线照射 30min 的超净工作台台面。
3. 在超净工作台中按次序摆放消过毒的离心管、 吸管、 培养瓶等。
4. 迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻, 并要不断的摇动, 使管中的液体迅
速融化, 时间控制在 1 分钟左右。
5. 融解好的细胞迅速放进离心机中, 2000r/min 或者 600g 离心 2min。
6. 用 4-5ml 完全培养基重悬细胞, 吹打制成单细胞悬液, 细胞浓度以 5×105/ml 为宜。
7. 将复苏好的细胞悬液分装入培养瓶内, 将培养瓶放入 37℃和 5%CO2 的培养箱内, 8-24
小时后换液继续培养, 换液时间由细胞生长情况而定。
二、 传代培养
1. 细胞吸除或倒掉原瓶中的旧培养基(以 25mL 培养瓶为例) 。
2. 每瓶加入 2mL, 无钙、 镁 PBS, 漂洗一次后倒掉。
3. 每瓶加入 1mL 消化液(0.25%胰蛋白酶或 0.02%EDTA 或混合液) , 轻轻摇动培养瓶, 经
消化液铺满所有细胞表面, 待细胞层略有松动, 肉眼可观察到“薄膜”现象时, 倒掉消化液,
再继续作用 2~3 分钟, 轻轻摇动, 细胞层可随残留的消化液呈片状从瓶壁上脱落下来, 在显
微镜下可发现细胞回缩变圆, 细胞间隙增大, 此时应立即终止消化。
4. 加入完全培养基 5mL, 用吸管反复吹打瓶壁上的细胞, 吹打时要按顺序进行, 以确保所
有瓶壁均吹打到, 吹打时动作要轻柔, 不要用力过大, 尽可能不要出现泡沫, 以避免细胞的
机械损伤。
5. 细胞用计数板计数, 计算细胞的浓度, 并用培养基调整适当的细胞浓度后再分瓶培养。
三、 细胞冻存
1. 配制含 10%DMSO 或甘油、 10~20%小牛血清的冻存培养液;
2. 取对数生长期的细胞, 去除旧培养液, 用 PBS 清洗。
3. 去除 PBS, 加入适量胰蛋白酶(覆盖培养皿表面) 把单层生长的细胞消化下来;
4. 离心 1000rpm, 5min;
5. 去除胰蛋白酶, 加入适量配制好的冻存培养液, 用吸管轻轻吹打使细胞均匀, 计数, 调
节冻存液中细胞的最终密度为 5×106/ml~1×107/ml;
6. 将细胞分装入冻存管中, 每管 1~1.5 ml;
7. 在冻存管上标明细胞的名称, 冻存时间及操作者;
8. 冻存: 标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min; 当温度达-25℃以下时, 可增至-5℃~
-10℃/min; 到-100℃时, 则可迅速浸入液氮中。 也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱 2h ,
然后放入-70℃冰箱中过夜, 取出冻存管, 移入液氮容器内。
四、 注意事项
1. 培养基于 4℃条件下可保存 3-6 个月。
2. 在细胞培养过程中, 请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中, 胰酶消化时间不宜过长, 否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前 3 天每个倍数各拍几张细胞照片, 记录细胞状态, 便于和
技术部沟通; 由于运输的原因, 个别敏感细胞会出现不稳定的情况, 请及时
和我们联系, 详尽告知细胞的具体情况, 以便我们的技术人员跟踪、 回访直至问
题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
备注: 由于实验所用试剂、 操作环境及操作手法的不同, 以上方法仅供各实验室参考。


 

深圳市拓普生物科技有限公司

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