STR 鉴定

服务名称 ：技术服务

提供商 ：吉妮欧

背景介绍
在过去的 45 年里，细胞生物学方面的数据一直在发表，但是应用于生物医学研究领域的哺乳动物细胞被错误鉴定和交叉污染的问题，一直是一个普遍存在的突出问题。

早在1970年代，一项研究就发现，被广泛使用的Hela细胞系就曾被污染，这一事件当时就促使细胞系质量控制手册的诞生。HeLa细胞株是由正常子宫颈细胞被一 人类乳突状瘤病毒（Human Papillomavirus18或HPV18）转型成癌细胞的，而且和正常子宫颈细胞有许多不同。

据估计，国外实验室已建株细胞有接近 20% 存在上述问题，有 15-25% 的研究论文因为使用了被错误辨识和交叉污染的细胞而导致错误的结论。这造成大量研究经费的浪费，并产生了大量无效或错误数据。另有文献报道称：中国建立的人源细胞系竟高达85.51%是错的!近年来，大量研究表明STR基因分型方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的最有效和准确的方法之一，STR基因分型应用于细胞鉴定已被ATCC等机构强烈推荐。

美国的ATCC细胞库、德国的DSMZ细胞库以及日本的JCRB细胞库等为STR分型提供了各细胞株的数据供比对。

细胞STR鉴定技术原理
STR（Short Tandem Repeat，短串联重复序列）基因位点由长度为3～7个碱基对的短串连重复序列组成，这些重复序列广泛存在于人类基因组中，可作为高度多态性标记，被称为细胞的DNA指纹。STR已被广泛应用于亲子鉴定、个体识别、司法鉴定、交通事故鉴定、（造血干细胞）移植治疗后嵌合情况监测等领域。STR基因座位上的等位基因可通过PCR（聚合酶链式反应）扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分，在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测来识别，随后通过一定的计算方法，即可根据所得的STR分型结果与专业的细胞STR数据库比对从而推算出样品所属的细胞系或可能的交叉污染的细胞系名称。

人源细胞STR鉴定
人源细胞STR分型(cell line STR genotyping),是选用D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、PentaE、TH01、D12S391、D2S1338和FGA等19个具有高度多态性基因座和一个性别基因位点Amelogenin对人源细胞进行STR分型检测。

根据STR分型结果对细胞的生长状态(是否存在交叉污染）和细胞的株系进行确认的技术手段。本公司选用D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、vWA、TPOX、TH01、Amelogenin这9种基因座对人源细胞进行STR分型检测，在ATCC细胞库的STR分型数据库中提供了人源细胞这九种基因座的数据进行比对。

细胞STR鉴定步骤
1.提取样品细胞DNA(DNA浓度150ng/ul左右)。

2.多重PCR(9对引物在一个反应体系扩增)，将9对引物以适量比例混合成为混合引物，反应体系：







3.PCR产物通过ABI 3730XL 测序仪器进行毛细管电泳检测，获得扩增片段大小的数据。

4.用GeneMarker V2.6.3 (Demo)软件对收集到的数据进行处理分析，将产物片段大小、数量多少的信息转化成直观准确的波形图谱。


5.对比ATCC细胞库的 STR数据库。

6.提交报告。

广州吉妮欧生物科技有限公司成立于 2011 年，是一家立足于生物医药技术研发，服务于各大科研院校、医院和药企，致力于临床转化和产业化应用的高新技术公司。公司建立了国内最具规模的细胞-动物平台，其中细胞平台涵盖各类正常/肿瘤细胞株、耐药株、荧光示踪细胞、原代细胞、基因敲除细胞等近千种，并且提供丰富的细胞功能学检测服务：血管生成实验、Transwell侵袭力检测、划痕迁移实验、克隆形成实验、STR 检测等。同时公司的SPF 级动物实验平台，提供从普通大小鼠到免疫缺陷鼠（裸鼠、NOD/SCID、NSG）饲养与建模服务：PDX 肿瘤模型、HBV 乙肝模型、PD 帕金斯症模型、糖尿病模型等。以基础科研平台和技术研发为依托，公司持续的推动临床应用的产业化，分别建立了个体化肿瘤精准治疗研究中心和新一代药效筛选服务平台，借助这两个产业化平台，公司将更快更好的将新技术向临床转化落地，让科研成果更多的服务社会大众，推动生命健康领域的发展。截止目前公司已与300 多家高校、医院、药企等建立了良好的合作关系，客户遍及港、澳及全国各地。未来公司也将一如既往地，以更好的产品、更高的质量、更优的服务回馈每一个客户。诚为基质为本协为赢，吉妮欧期待与您的合作！
 
细胞检测平台
可提供细胞增殖/细胞毒性、细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移/细胞侵袭等细胞学检测技术服务。通过细胞学检测可以对目的基因的生理功能及其相互作用进行研究,是基础科研及药物研发中检测物质毒性、评估药物安全性及有效性、肿瘤的发生及增值等的重用手段。

分子检测平台
可提供反转录PCR 、荧光定量PCR 、定点突变、载体构建、种属鉴定、质粒提取等常规分子生物学技术服务，此外凭借分子平台专业团队多年经验积累，可开展基因编辑技术(CRSPR Cas9)、miRNA 靶基因的预测与验证、双荧光素酶报告基因检测等特色技术服务。分子检测广泛应用于科学研究及医疗诊断领域，为疾病的研究和诊断提
供更准确、更科学的信息和依据。为生物学和医学的各个领域，提供了一个强
有力的技术平台。

蛋白检测平台
可提供WB 、IHC 、IF 、IP/CO-IP 、ELISA 等免疫学检测服务。免疫学检测是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原，可以定性、定位和定量地检测某一特异蛋白。这些方法为科研人员在研究诸如细胞信号通路、生理过程调控、代谢调节等方面提供重要手段。'

病毒平台
可提供慢病毒包装、腺病毒包装、稳转细胞株筛选的技术服务。当代基因治疗研究的热门方法是将外源基因（癌基因、病毒基因）DNA 或 RNA 片段导入靶细胞或组织，研究靶基因的上调或抑制情况。有些基因本身有治疗作用，体外合成该基因导入体内使其表达丰度提高。病毒载体由于其具有高效的靶向特异性，被广泛选为基因导入介质系统，已成为当前基因治疗载体研究的热点。