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库存 :546
英文名 :Soluble TMB Kit(20×)
保质期 :长期
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
保存条件 :2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应TMB底物显色试剂盒(可溶型,20×) 蛋白质研究,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:TMB底物显色试剂盒(可溶型,20×) 蛋白质研究
英文名:Soluble TMB Kit(20×)
规格:100ml
编号:WE0309
TMB(3", 3", 5", 5", -四甲基联*(代"*")*(代"胺"))是辣根过氧化物酶(HRP)显色底物,是目前HRP系统ELISA实验的常用显色试剂。TMB显色底物工作液在HRP的催化下,形成蓝色的阳离子产物,在370 nm和652 nm处有主要吸收峰。加酸终止反应后,蓝色转变为黄色,可以在450 nm波长下测定。本试剂盒使用方便,灵敏度高,效果稳定,颜色产物为可溶性,适用于ELISA,不推荐用于IHC实验。
试剂盒组成:
组份 | 100ml |
20×T MB-A | 5ml |
1×TMB-B | 2×50ml |
注意事项:
1、显色工作液应即用即配,放置超过10分钟会影响显色效果。
2、TMB颜色底物显色后,随着时间的延长,颜色会逐渐消退,因此显色并终止反应后应尽快读值,否则会影响检测的准确性。
3、以96孔酶标板每孔用量100μl显色工作液计算,5ml 20×TMB Kit 可完成1000孔样品的检测。
4、本产品仅限于科研,不能用于人体实验或人体治疗。
操作步骤:
1、TMB显色工作液配制:
根据实验需用量,将20×TMB-A和1×TMB-B以1:19的比例均匀混合,即配制成为TMB显色工作液。
2、显色:
1)经HRP标记物孵育并充分洗涤后,酶标板每孔中加100μl TMB显色工作液。
2)室温避光孵育25-30分钟,反应产物呈蓝色。
3)每孔加50μl 0.5M H2SO4 终止显色,此时蓝色产物变为亮黄色。
4)将酶标板置于酶标仪中,450 nm波长下读取数据。
储存条件:2~8℃
更多有关TMB底物显色试剂盒(可溶型,20×) 蛋白质研究的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
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TMB底物显色试剂盒(可溶型,20×) 蛋白质研究关键词:WE0309,TMB底物显色试剂盒,Soluble TMB Kit(20×),TMB底物显色试剂盒(可溶型,20×)
·土壤基因组提取试剂盒
编号:WE0187
英文名称:Soil Genomic DNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的干燥土壤、湿泥、淤泥及海河沉淀物中提取总DNA。本产品使用安全方便,单个样品操作一般可在40分钟内完成。使用本品每克土壤可获得5μg以上的DNA,片段长度主要在20-30 kb之间。本试剂盒采用独特的溶液能够有效去除杂质和腐殖酸,通过优化的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上,土壤中残留的杂质、PCR和酶反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
试剂盒组成:
组份 | 50次 |
Buffer SW | 60ml |
Buffer SL | 30ml |
Buffer GLS | 30ml |
Buffer PR(浓缩液) | 13ml |
Buffer GW1(浓缩液) | 13ml |
Buffer GW2(浓缩液) | 15ml |
Buffer GE | 15ml |
吸附柱DM及收集管 | 50套 |
自备试剂:无水乙醇,70%乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PR、GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer SL和Buffer GLS是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer SL和Buffer GLS于56℃水浴重新溶解。
操作步骤:
1、取0.1 g-0.3 g土壤样本,置于离心管(自备)中,加入1ml Buffer SW,涡旋振荡1-3分钟(须将管底的土壤震起来)。12000rpm(~13400×g)离心1分钟,倒掉上清。
2、加入750μl的70%乙醇,涡旋振荡1分钟(须将管底的土壤震起来),12000rpm离心1分钟,倒掉上清,用移液器将余液吸尽。
3、向沉淀中加入500μl Buffer SL,涡旋振荡1-3分钟(须将管底的土壤震起来),65℃水浴20分钟(可每隔5分钟涡旋振荡5秒),12000rpm离心3分钟,将上清移至新的离心管(自备)中。
4、向上清液中加等体积Buffer GLS,颠倒混匀15-25次,冰上放置5分钟。12000rpm离心5分钟。
注意:冰上放置后液体可能会凝结,属正常现象。
5、将步骤4中所得上清加入到已装入收集管的吸附柱DM中,12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:若一次不能加完溶液,可分多次转入。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer PR(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μlBuffer GE或灭菌水,室温放置 2-5分钟, 12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10;若洗脱体积小于100μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
6)基因组DNA模板中微量的残余腐殖酸可能对PCR反应产生不良影响。此时将DNA稀释5-100倍问题通常即可解决。如经稀释后的DNA仍不能有效应用于PCR反应, 请使用腐殖酸清除剂,以获得更高效的清除效果。
储存条件:室温(15~30℃)。
TMB底物显色试剂盒(可溶型,20×) 蛋白质研究关键词:WE0309,TMB底物显色试剂盒,Soluble TMB Kit(20×),TMB底物显色试剂盒(可溶型,20×)
·cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)
编号:WE0133
英文名称:BalbScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit
规格:100次
本试剂盒是用于去除基因组DNA进行反转录的试剂盒。该试剂盒在42℃,2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制gDNA Eraser的组分,经过 gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行逆转录反应合成cDNA。本试剂盒配有新型高效反转录酶BalbScript,新颖突变位点大幅提升酶的转录活性,cDNA第一链合成的效率和产量更高,可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNA第一链。如逆转录产物cDNA用于下游荧光定量检测,可在42℃,15min完成逆转录反应。本试剂盒适用于第一链cDNA的合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR、以及全长cDNA文库的构建等。
试剂盒组成:
组份 | 25次 | 100次 |
gDNA Eraser | 12.5μl | 50μl |
10×gDNA Eraser Buffer | 30μl | 120μl |
BalbScript,200 U/μl | 25μl | 100μl |
5×ScriptRT Buffer | 120μl | 500μl |
Primer Mix | 30μl | 120μl |
RNase-Free Water | 1ml | 2×1ml |
产品特点
1、快速去除基因组:含有去除基因组DNA 的gDNA Eraser,只需2min即可除去基因组DNA。
2、快速逆转录:15分钟即可获得荧光定量PCR模板cDNA第一链合成。
3、灵敏度高:可利用pg级总RNA或mRNA模板合成cDNA第一链。
4、高效的逆转录效率:新颖突变位点大幅提升酶活性能,获得更高产量的cDNA。
注意事项:
1、在操作过程中应避免RNase污染,防止RNA降解或实验中的交叉污染,建议操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套,使用专门的仪器和耗材。
2、逆转录体系配制在冰上进行操作,防止RNA发生降解。试剂盒的酶使用后尽快置于-20 ºC保存,并尽量避免反复冻融。
3、反应体系可倍比放大,10μl反应体系可最大使用1μg总RNA。
4、Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成, 也可根据实验需要选用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。
5、若起始RNA的量小于50ng,建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号为WE0223。
6、对于二级结构复杂的RNA模板,建议在操作步骤之前,将模板RNA在65℃孵育5分钟立刻置于冰上,短暂离心后进行下一步操作。
操作步骤:
将模板RNA在冰上解冻;试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀,并经短暂离心后使用。
一、去除基因组DNA反应
1、根据以下表格在冰上配制反应体系,总体积为10μl。为了保证反应液配制的准确性,先按反应数+2的量配制预混体系,然后再分装到每个反应管中,最后加入RNA样品。
试剂 | 10μl反应体系 |
10×gDNA Eraser Buffer | 1μl |
gDNA Eraser | 0.5μl |
RNA Template | 10 pg-1μg |
RNase-Free Water | up to 10μl |
注意:如果总RNA量大于1μg,请按比例扩大反应体系。若起始RNA的量小于50ng,则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin),该产品货号为WE0223。
2、涡旋震荡混匀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
3、42℃孵育2分钟(室温反应时,可以延长到30分钟)。
4、反应结束后,短暂离心,置于冰上冷却。
二、逆转录反应
1、根据以下表格在冰上配制反应体系,反应液配制请在冰上进行。为了保证反应液配置的准确性,先按数+2的量配制成预混溶液,然后再分装 10μl到每个反应管中,取配制的预混液10μl加入至已完成去基因组的步骤1反应管中。
试剂 | 20μl反应体系 |
步骤1反应液 | 10μl |
BalbScript,200 U/μl | 1μl |
Primer Mix | 1μl |
5×ScriptRT Buffer | 4μl |
RNase-Free Water | 4μl |
注意:可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer,建议20μl 反应体系Oligo-dT Primer 50pmol,或Gene Specific Primer 2 pmol。
2、混匀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
3、cDNA合成反应条件:
1)若下游进行荧光定量PCR检测,42℃孵育15分钟,85℃孵育5分钟。
2)若下游进行普通PCR检测,42℃孵育30-50分钟,85℃孵育5分钟。
注意:对于二级结构复杂或GC含量高的模板,可以提高逆转录温度至50℃,增强逆转录效率。
4、反应结束后,短暂离心后置于冰上,再进行后续PCR或荧光定量PCR,如果需要长时间保存,请置于-20℃。
注意:进行Real-time PCR反应时,逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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