AAV-293；腺病毒转化的人胚肾细胞

库存 ：10

细胞类型 ：见说明书

组织来源 ：见说明书

物种来源 ：人大小鼠等

免疫类型 ：见说明书

细胞形态 ：见说明书

运输方式 ：原代冻存干冰运输，传代室温运输

年限 ：一年

生长状态 ：见说明书

规格 ：1×106cells/T25培养瓶

一．产品简介

1、细胞名称：AAV-293；腺病毒转化的人胚肾细胞

2、生长特性：    □ 贴壁   （贴壁不牢容易脱落，消化无需胰酶请谨慎操作。）

3、细胞生长条件：

培养条件	90%DMEM（高糖）+10%FBS+1%P/S
温度	37℃
空气条件	5% CO2,100% AIR
传代方法	1:2传代，2~3天换液
冻存条件	90%FBS+10%DMSO

4.背景资料：我们推荐使用AAV-293细胞株繁殖腺病毒相关重组病毒。 AAV-293源自普遍使用的 HEK293细胞株，但产生的病毒滴度更高。 HEK293细胞是剪切过的腺病毒5型DNA转染的人胚肾细胞。 跟HEK293细胞一样，AAV-293细胞反式表达腺病毒E1基因，当共转染三个AAV助质粒(一个含ITR的质粒，pAAV-RC, 和E1缺失助质粒)时，可以产生有感染力的腺病毒-相关病毒颗粒。
二．使用方法
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm²培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm²培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）用5-6ml完全培养基轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO₂细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm²培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm²培养瓶，于37℃，5%CO₂细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。