pET-N-GST-Thrombin-C-His

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英文名 ：pET-N-GST-Thrombin-C-His

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规格 ：1μg

pET-N-GST-Thrombin-C-His

产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
LM2911	pET-N-GST-Thrombin-C-His	1μg	888.00元

      pET-N-GST-Thrombin-C-His是一种用于表达N端含GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)或C端含His标签(His tag)的重组蛋白的原核表达质粒，也可用于表达N端含GST标签并且同时C端含His标签的重组蛋白。GST和His双标签有利于通过GST柱和镍柱两种方法来纯化目的蛋白，使目的蛋白的纯度更高。本质粒N端GST标签后有Thrombin酶切位点，可通过Thrombin蛋白酶切除N端的GST标签。本质粒为卡那霉素抗性。
      本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列，后面有一个His标签的编码序列，后者含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据读码框插入不含终止密码子的目的基因就可以表达N端含有GST标签并且C端含有His标签的目的蛋白。也可以在目的基因后面添加终止密码子，这样就可以表达仅在N端含有GST标签的目的蛋白。如果在NdeI和多克隆酶切位点之间按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因，这样就可以表达仅C端带有His标签的目的蛋白。
      本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有Thrombin蛋白酶识别的6肽序列LVPRGS，对应的核酸序列为CTGGTTCCGCGTGGATCC，因此在目的蛋白纯化后可以利用Thrombin酶切除N端的GST标签。Thrombin蛋白酶酶切发生在六肽序列的R和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GS。
      通常可以采用如BeyoGold™ GST-tag Purification Resin (LM2251/LM2253/LM2255)、GST标签蛋白纯化试剂盒(LM2262)、BeyoGold™ His-tag Purification Resin (LM2210/LM2218/LM2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(LM2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用GST抗体(LM768/LM0174)和His-tag抗体(LM367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
      pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒(5955bp)的图谱如下：

      pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
f1 origin	12-467
Kanamycin resistance ORF	563-1645
PBR 322 origin	2084
LacI coding sequence	3518-4597
T7 promoter	4988-5004
GST tag coding sequence	5076-5732
Thrombin recognition site sequence	5739-5756
Multiple cloning site(BamHI-XhoI)	5751-5798
His tag coding sequence	5799-5816
T7 Terminator	5884-5930

      pET-N-GST-Thrombin-C-His的多克隆位点的详细图谱如下：

	XbaIrbsNdeI
5026	AATTCCCCTC    TAGAAATAAT    TTTGTTTAAC    TTTAAGAAGG    AGATATACAT
	TTAAGGGGAG    ATCTTTATTA    AAACAAATTG    AAATTCTTCC    TCTATATGTA
	GSTtag
5076	ATGATGTCCC    CTATACTAGG    TTATTGGAAA    ATTAAGGGCC    TTGTGCAACC
	TACTACAGGG    GATATGATCC    AATAACCTTT    TAATTCCCGG    AACACGTTGG
5126	CACTCGACTT    CTTTTGGAAT    ATCTTGAAGA    AAAATATGAA    GAGCATTTGT
	GTGAGCTGAA    GAAAACCTTA    TAGAACTTCT    TTTTATACTT    CTCGTAAACA
5176	ATGAGCGCGA    TGAAGGTGAT    AAATGGCGAA    ACAAAAAGTT    TGAATTGGGT
	TACTCGCGCT    ACTTCCACTA    TTTACCGCTT    TGTTTTTCAA    ACTTAACCCA
5226	TTGGAGTTTC    CCAATCTTCC    TTATTATATT    GATGGTGATG    TTAAATTAAC
	AACCTCAAAG    GGTTAGAAGG    AATAATATAA    CTACCACTAC    AATTTAATTG
5276	ACAGTCTATG    GCCATCATAC    GTTATATAGC    TGACAAGCAC    AACATGTTGG
	TGTCAGATAC    CGGTAGTATG    CAATATATCG    ACTGTTCGTG    TTGTACAACC
5326	GTGGTTGTCC    AAAAGAGCGT    GCAGAGATTT    CAATGCTTGA    AGGAGCGGTT
	CACCAACAGG    TTTTCTCGCA    CGTCTCTAAA    GTTACGAACT    TCCTCGCCAA
5376	TTGGATATTA    GATACGGTGT    TTCGAGAATT    GCATATAGTA    AAGACTTTGA
	AACCTATAAT    CTATGCCACA    AAGCTCTTAA    CGTATATCAT    TTCTGAAACT
5426	AACTCTCAAA    GTTGATTTTC    TTAGCAAGCT    ACCTGAAATG    CTGAAAATGT
	TTGAGAGTTT    CAACTAAAAG    AATCGTTCGA    TGGACTTTAC    GACTTTTACA
5476	TCGAAGATCG    TTTATGTCAT    AAAACATATT    TAAATGGTGA    TCATGTAACC
	AGCTTCTAGC    AAATACAGTA    TTTTGTATAA    ATTTACCACT    AGTACATTGG
5526	CATCCTGACT    TCATGTTGTA    TGACGCTCTT    GATGTTGTTT    TATACATGGA
	GTAGGACTGA    AGTACAACAT    ACTGCGAGAA    CTACAACAAA    ATATGTACCT
5576	CCCAATGTGC    CTGGATGCGT    TCCCAAAATT    AGTTTGTTTT    AAAAAACGTA
	GGGTTACACG    GACCTACGCA    AGGGTTTTAA    TCAAACAAAA    TTTTTTGCAT
5626	TTGAAGCTAT    CCCACAAATT    GATAAGTACT    TGAAATCCAG    CAAGTATATA
	AACTTCGATA    GGGTGTTTAA    CTATTCATGA    ACTTTAGGTC    GTTCATATAT
5676	GCATGGCCTT    TGCAGGGCTG    GCAAGCCACG    TTTGGTGGTG    GCGACCATCC
	CGTACCGGAA    ACGTCCCGAC    CGTTCGGTGC    AAACCACCAC    CGCTGGTAGG
	ThrombinPstI
	↓BamHI   HindIIIEcoRIEcoRV
5726	TCCAAAATCG    GATCTGGTTC    CGCGTGGATC    CAAGCTTCTG    CAGGAATTCG
	AGGTTTTAGC    CTAGACCAAG    GCGCACCTAG    GTTCGAAGAC    GTCCTTAAGC
	SalIBglIIXhoIHistag
5776	ATATCGTCGA    CAGATCTCTC    GAGCACCACC    ACCACCACCA    CTGAGATCCG
	TATAGCAGCT    GTCTAGAGAG    CTCGTGGTGG    TGGTGGTGGT    GACTCTAGGC

      pET-N-GST-Thrombin-C-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-Thrombin-C-His)包括：

AatII	Acc65I	AflII	AgeI	AhdI	AleI	AscI
AvrII	BaeI	BbvCI	BfuAI	BmgBI	BmtI	BsaI
BseRI	BsiWI	BspMI	BsrGI	Bsu36I	CspCI	EagI
Eco53kI	FseI	KpnI	MfeI	NcoI	NheI	NotI
PacI	PmeI	PmlI	PspXI	RsrII	SacI	SacII
SbfI	SexAI	SfiI	SnaBI	SpeI	SrfI	StuI
ZraI

      pET-N-GST-Thrombin-C-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-Thrombin-C-His once)包括：

DraIII	CAC,NNN`GTG	242	BstEII	G`GTNAC,C	4060
PsiI	TTA|TAA	370	MluI	A`CGCG,T	4242
PvuI	CG,AT`CG	943	BstAPI	GCAN,NNN`NTGC	4563
AsiSI	GCG,AT`CGC	943	SphI	G,CATG`C	4771
SmaI	CCC|GGG	1067	SgrAI	CR`CCGG,YG	4923
XmaI	C`CCGG,G	1067	XbaI	T`CTAG,A	5034
TspMI	C`CCGG,G	1069	NdeI	CA`TA,TG	5074
NruI	TCG|CGA	1286	MscI	TGG|CCA	5286
AcuI	CTGAAG(N)14,NN`	1597	BstBI	TT`CG,AA	5476
AlwNI	CAG,NNN`CTG	1729	SwaI	ATTT|AAAT	5506
BssSI	C`ACGA,G	1968	ScaI	AGT|ACT	5652
BstZ17I	GTA|TAC	2374	BamHI	G`GATC,C	5751
Tth111I	GACN`N,NGTC	2399	HindIII	A`AGCT,T	5757
PflFI	GACN`N,NGTC	2399	PstI	C,TGCA`G	5763
PpuMI	RG`GWC,CY	3136	EcoRI	G`AATT,C	5769
FspI	TGC|GCA	3164	EcoRV	GAT|ATC	5777
BglI	GCCN,NNN`NGGC	3182	SalI	G`TCGA,C	5781
PshAI	GACNN|NNGTC	3401	BglII	A`GATC,T	5787
HpaI	GTT|AAC	3740	XhoI	C`TCGA,G	5793
BssHII	G`CGCG,C	3831	PaeR7I	C`TCGA,G	5793
ApaI	G,GGCC`C	4035	BlpI	GC`TNA,GC	5872
PspOMI	G`GGCC,C	4035	StyI	C`CWWG,G	5894
NmeAIII	GCCGAG(N)19,NN`	4041

      pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
      pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
      pET-R primer (5869-5888): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
      pET-N-GST-Thrombin-C-His的全序列信息：LM2911 pET-N-GST-Thrombin-C-His.txt。
      不同原核表达质粒的比较和选择，以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页：
      http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
LM2911	pET-N-GST-Thrombin-C-His	1μg
—	说明书	1份

保存条件：
      -20℃保存。
注意事项：
      本质粒未经联迈生物书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。