SP6体外转录试剂盒报价价格_品牌:百奥莱博-丁香通官网

库存：609

英文名：SP6 in vitro Transcription Kit

保质期：一年

供应商：北京百奥莱博科技有限公司

保存条件：2～8℃

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")SP6体外转录试剂盒报价，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：SP6体外转录试剂盒报价
编号：BTN91107
规格：50次
产地：国产|进口
英文名：SP6 in vitro Transcription Kit
本试剂盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有SP6启动子的模版DNA，以NTP为底物，从SP6启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含SP6启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 kb片段)	20μL(10 ng/μL)
SP6 RNA聚合酶混合液	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。一是必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。二是需要转录的DNA序列的上游必须有SP6启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将SP6启动子序列(5´ATT TAG GTG ACA CTA TAG AGN G 3´)加上，转录其实是从3端G AGN G中的第一个G开始。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有SP6启动子的载体，并且克隆位点必须位于SP6启动子下游。三是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。四是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板	xμL	总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段，建议用50 ng左右；如果模板是质粒DNA，建议用1μg左右；如果用本产品提供的阳性对照，建议用4μL)
SP6转录预配液(2×)	10μl	本成分还含其他促进剂，所以是混合物
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活SP6 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。
1.在体外转录体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL。
4. 用等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1. 没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量，本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2. RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3. RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有SP6 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。
4. RNA长度比预计的长。SP6 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5. 5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则SP6 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。
6. 如何得到带帽RNA？需加入带帽NTP类似物即可，本公司提供5种供选择。

SP6体外转录试剂盒报价极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：
58-58-2 嘌呤霉素盐*(代"酸")盐 Puromycin,2HCl
DP432 植物总RNA提取试剂盒
BTN100844 PCR优化试剂盒 PCR Optimization Kit
乙二*(代"胺")四乙酸二*盐 D(+)-Arabitol 25102-12-9
TSA溶液(pH8.0)   500ml
3326-32-7 异硫*酸荧光素 FITC
2′-*脱氧尿苷 Poly C 784-71-4
Acr-Bis(30%:0.8%)   500ml
脱落酸 Cinnamyl alcohol 21293-29-8
ARB10042 人Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)含量测试 Human collagen type Ⅱ,col Ⅱ ELISA KIT
F040104 鸡卵清蛋白偶联三聚*胺 OVA-MEL
548-62-9 Crystal violet 结晶紫
PY01-003  酪蛋白胨  250克
ARB11012 人补体片断5b(C5b)ELISA检测服务 Human complement fragment 5b,c5b ELISA KIT
ARB13660 兔分泌型免疫球蛋白A(sIgA)代做ELISA实验 Rabbit  secretory immunoglobulin a,siga ELISA KIT
SJ0679 Marker Ⅴ
ARB12996 小鼠抗平滑肌抗体(ASMA)Elisa方法检测 Mouse anti-smooth muscle antibody,asma ELISA KIT
ZCNXQ01 超级胎牛血清 100ml
ARB12224 大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢA(GP-ⅡbⅢA/CD41+CD61)Elisa定量检测 Rat platelet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,gp-ⅡbⅢa ELISA KIT
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·96孔板病毒DNA提取试剂盒(真空法)
编号：BTN131197
英文名称：Virus DNA extraction kit(96-well plates)(Vacuum method)
规格：1次

·非酶RNA清除剂1.0
编号：BTN51203
英文名称：Non-enzymatic RNA scavenger 1.0
规格：1.5mL
本品为非酶法质粒RNA和蛋白质污染的去除试剂，专用于从碱变性法纯化的质粒中去除其中的绝大部分RNA污染和大部分蛋白质污染。

产品特点：
1.高效，能去除质粒粗提物中80%左右的RNA污染和60%的蛋白污染。而常用的RNase或LiCl处理只能去除RNA，不能去除蛋白质污染。
2.快速，整个过程只需要十余分钟，不需要37℃保温。
3. 经过本产品处理过的样品，由于没有RNA和蛋白质的干扰，使用硅胶膜或其他吸附离心法吸附、回收质粒DNA的效率比没处理过的样品更高。
4. 价格不到RNase A的1/2，在质粒的大规模制备时成本优势更加明显。
5. 制备临床用(如基因治疗)的质粒DNA时，可以减少后期在临床报批、生产、质检和使用中的很多麻烦(使用生物来源的RNase A和蛋白酶时，容易带入对人体有害的内毒素、LPS等污染物)。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：

一、从碱变性澄清液中去除RNA和蛋白质
1. 将约1/5体积的RNA Scavenger加入到碱变性澄清液中(加溶液III后离心得到的上清液一般是450μl，所以需要加入50μl)。
2. 混匀后室温放置10分钟。
3.室温8000g离心10分钟。
4.转移上清到一新的离心管中，后续处理跟经典的方法一样(即加入等体积的异丙醇或两倍体积的乙醇,混匀后室温离心10分钟,弃上清液后用1mL 75%乙醇洗一次,短暂离心，去掉残留液体,加入适量TE缓冲液溶解质粒待用)。

二、从质粒粗提液中去除RNA和蛋白质
1、将1/4体积的RNA Scavenger-1直接加入到已经溶解在TE或其他溶解液的质粒DNA中。
2、混匀后室温放置10分钟。
3、室温8000g离心10分钟。
4、转移上清到一新的离心管中，加入等体积的异丙醇或两倍体积的乙醇。
5、混匀后室温离心10分钟。
6、弃上清液后用1mL 75%乙醇洗一次。
7、短暂离心，去掉残留液体。
8、加入适量TE缓冲液溶解质粒待用。

使用效果：
非酶RNA清除剂1.0

图注：用经典的碱变性法从1.5mL E.coli过夜培养液中提取的pGEM-3质粒粗提物(加溶液ⅡI离心上清)经过RNA Scavenger处理后(LA+RNA Scavenger)与未经处理的样品(AL)电泳比较。上样量为1/5。
非酶RNA清除剂1.0

图注：用经典的碱变性法提取的pGEM-3质粒DNA溶于TE中后，经过RNA Scavenger处理的(+)与未经处理的(-)样品进行电泳比较。处理过的样品失去80%左右的RNA。

疑难解答：
Q：电泳检测质粒DNA时也需要将其RNA污染去掉吗?
A：是。否则RNA 将结合大部分的EB溶液,使质粒DNA的带型减弱。
Q：RNA Scavenger-1跟RNA Scavenger-2 有何区别？
A：
1. RNA Scavenger-2处理过的样品不再需要醇/盐沉淀处理，而RNAScavenger-1处理的样品还需要醇/盐沉淀去除RNA Scavenger-1；
2. RNA Scavenger-2与柱式硅胶膜纯化方法兼容，而RNA Scavenger-1 不兼容；
3. RNA Scavenger-2 不但可以用于去除质粒DNA的RNA污染，还可以用于去除基因DNA的RNA污染，而RNA Scavenger-1只能用于质粒DNA样品。

SP6体外转录试剂盒报价关键词：SP6 in vitro Transcription Kit,BTN91107,SP6体外转录试剂盒

·9°N DNA连接酶
编号：BTN130624
英文名称：9°N DNA Ligase
规格：2500U
9°N DNA连接酶能够催化磷酸二酯键的形成，使与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5´-磷酸末端和3´-羟基末端通过磷酸二酯键相连。该酶在45℃-90℃范围内均有活性。

产品用途：
1．可在高温条件下，连接DNA链上的切刻位点；
2．具有极高的耐热性，与PCR反应条件兼容；
3．可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测；
4．通过PCR扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变。

产品组成：

组份	规格
9°N DNA连接酶(40000U/mL)	62.5μL
10×Buffer	1.5mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指50μl反应体系中，45℃条件下，15分钟能使50%的1μg BstEII消化的λDNA片段(12bp 粘性末端)发生连接所需要的酶量。粘性末端活性单位相当于切口封闭单位。

注意事项：9°N DNA连接酶不能代替T4 DNA连接酶使用。该酶可以有效连接12bp的互补片段，但却无法连接4bp的互补片段(典型限制酶消化产物)。