柱式土壤RNAout

保质期 ：1年

供应商 ：上海雅吉生物科技有限公司

保存条件 ：-20

规格 ：50次

柱式土壤RNAout专门用由于土壤中有机质含量丰富，尤其是其中的腐殖酸对RT-PCR等后续反应有极
大的抑制作用，所以从土壤微生物提取高纯度的RNA一直是十分棘手的问题。本产
品是天恩泽精心优化的专门用于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的RNA
的试剂。它具有下列特点：
1. 去污染效果好，RNA纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右。
2. 扩容性好，既可以在1.5 mL离心管中微量提取，也可以在50 mL离心管中进行
大规模制备。
3. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
4. 性价比高于进口的土壤RNA提取产品。
5. 试剂无毒无害，环保。
使用及效果
将0.3-0.5 g土壤加入到1 mL溶液A中充分混合，加入0.3 mL溶液B和0.2 mL
氯仿，充分振荡混匀。离心3分钟后移上清到新的离心管中，加入0.5 mL溶液C和
0.2 mL氯仿充分振荡混匀。离心3分钟，移上清到新的离心管中，加入1/2倍体积
的溶液D，振荡混匀后离心5-30分钟，吸弃上清，用75%乙醇清洗两次即可。
注：土壤中所得RNA是各种真菌和细菌的RNA的混合物，所以一般不呈清晰带
型，
它具有下列特点：
1. 操作简单快捷，整个过程只需要约 30 分钟。
2. RNA 纯度高，OD260/280 一般都在 2.0 左右，可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
3. RNA 产量高，一般在 20-70 ug/mL 液体藻类培养物(约 2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。
柱式土壤RNAout规格及成分 成 份 编 号 50 次纸盒包装
溶液 A 120503A 50 mL
溶液 B 120503B 50 mL
溶液 C 120503C 100 mL
溶液 D 120503D 30 mL
离心吸附柱 60911 50 套
通用洗柱液 60408 100 mL
RNA 洗脱液 71207 10 mL
使用手册 120503sc 1 份

运输及保存 常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂 氯仿。
柱式土壤RNAout使用方法 1. 将 1-5 mL 液体藻类培养物在 1.5 mL 塑料离心管中 5,000-7,000 rpm4℃离心 1 分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
2. 加入 0.5 mL 溶液 A 并充分吹打混匀。注意：溶液 A 存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于 65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入 0.5 mL 溶液 B，剧烈振荡 30 秒。
4. 65℃保温 5 分钟。注意：不要超过 5 分钟，否则 RNA 容易降解。
5. 5,000-7,000 rpm 4℃离心 3-5 分钟，转移上清到一自备的、干净的1.5 mL 塑料离心管中。
6. 在上清液中加入 0.2 mL 自备的氯仿，充分振荡 30 秒混匀。
7. 4℃ 5,000-7,000 rpm 离心 3-5 分钟，转移上清液到一自备的、干净的 5-10 mL 塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液（约 1 mL 左右）3 倍体积的溶液 C 和 1 倍体积的溶液 D，充分混匀。如果上清为 1 mL，则加入 3 mL 溶液 C 和 1 mL 溶液 D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移 0.7mL 混合液到离心吸附柱中，室温放置 2-3 分钟以让 RNA 跟吸附膜充分结合，然后5,000-7,000 rpm 室温离心 30-60 秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入 0.7 mL 混合液，重复上面的操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将 0.7 mL 通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.3 mL 通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12. 室温离心空柱子（带收集管）半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 1.5 mL 塑料离心管中，加入30-100 uL RNA 洗脱液。具体加多少根据 RNA 浓度决定，建议先使用小体积洗脱液，这样浓度过高还可以稀释。
14. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：
注意：普通 DNA 上样液不含变性剂，更没经过去 RNase 处理，所以最好不要用于 RNA 电泳。
16. RNA 产量和纯度产率测定：将 5-10 uL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA 产量/细菌用量)。注意不要将 RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260 和 OD280，否则光吸收比在 TE(pH7.5-8.2 之间)中测得的低 10%-15%；也不要稀释过度，使 OD 读数在仪器的有效范围之外，这样得到的 OD 比值没有
意义。
疑难解答 Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组 DNA 吗？
A：不是。用 TAE 或 TBE 电泳液和非变性胶电泳 RNA 时容易产生此现象，雅吉基因初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链 RNA 通过碱基互补或通过硼酸络合（如果使用 TBE 作电泳液的话）形成的复合物，
加 RNase 处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使 RNA
变性。使用雅吉基因优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAON 可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用 TAE
或超快电泳液 SuperBuffer-2，最好不要使用 TBE 缓冲液，因为 TBE 中的硼酸能与 RNA 的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA 污染，可以用 RNase 处理 RNA 样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA 污染。进一步确
认可以使用 PCR 扩增法。去除污染的 DNA 可以使用 5 分钟柱式 DNA 清除剂、非酶的 DNA 去除剂 DNA Erasol 或 RNase-free DNase，由于RNase-free DNase 一般都有残留的 RNase 污染，所以必须严格按照厂家上海雅吉生物提供的使用手册进行操作。
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