一步法大提质粒DNAout

库存 ：100

英文名 ：DNAOUT 2.0（CAT#：70903）

保质期 ：2年

供应商 ：上海雅吉生物科技有限公司

保存条件 ：-20度保存

规格 ：5次

产品及特点：一步法大提质粒DNAout是在一步法质粒 DNAOUT 2.0（CAT#：70903）基础上开发的、能够快速从 100 mL 左右的 E.coli 培养液中取质粒 DNA 的产品。它只需要一种溶液即可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒 DNA。它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。本产品的主要特点是：
1. 快速，整个质粒 DNA 提取过程只需要不到 30 分钟，比传统的碱变性方法快捷。
2. 超螺旋比例高，独创的非碱法一步式细菌裂解技术，避免了强碱对DNA 的损害，得到的质粒 DNA 切口更少。
3. DNA 纯度高，几乎没有基因组 DNA 和 RNA 污染，OD260/280 一般在 1.7-1.9 之间。
4. DNA 可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。
5. 最大吸附量为 600 ug DNA，具体产率取决于质粒拷贝数。
6. 过程简单，重复性和稳定性好。

运输及保存 常温运输及保存（溶液 A 需要 4℃保存），有效期一年。
自备试剂 无
一步法大提质粒DNAout使用方法 1. 用 50 mL 离心管分数次收集 10-100 mL 新鲜的菌液，一般可以5000 rpm离心 10 分钟，去除上清即得细菌沉淀。
2. 往细菌沉淀中加入 20 mL 溶液 A，充分振荡悬浮或吹打混匀。注意：充分重悬细胞沉淀（无块状物）对于获得高的质粒产量十分重要。
3. 将裂解液全部转移到大离心吸附柱中，放入到配套的收集管中。
4. 6000 rpm 离心 5-10 分钟，弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒DNA，而将基因组 DNA 和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离心下去的裂解液，可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。
5. 将 10mL 通用预洗液加入到离心吸附柱中，室温静置 2 分钟后 6000 rpm离心 5 分钟，弃穿透液。
6. 重复上步一次。
7. 将 10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置 2 分钟后 6000 rpm离心 5 分钟，弃穿透液。
8. 重复上步一次。
9. 室温 6000 rpm 空甩 5 分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过。
10.将离心吸附柱放入一个自备的、干净的 50 mL 塑料离心管中，加 1 mL 通用洗脱液（洗脱液如加热到 50-65℃效果更佳），室温静置 2 分钟后 6000rpm 离心 5 分钟，收集液即是质粒 DNA 溶液。
11.重复上步 1 次以便洗脱更多的质粒 DNA。
12.合并所得质粒 DNA，立即使用或-20℃储存。
一步法大提质粒DNAout注意事项
1． 细菌培养时间一般为 12-16 小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒 DNA 突变。
2． 菌体过多会造成裂解液粘稠透，需要充分吹打，否则容易堵塞离心柱。
3． 通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
4． 质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般 1.5 mL 过夜培养菌体可收获约 10 ug 高拷贝质粒。
5． 从生长旺盛的细菌中纯化的质粒在电泳中表现为 2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，它们就是还未来得及分开的相套的质粒，易被误判为基因组 DNA。