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文献和实验
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保存条件 :阴凉干燥
保质期 :2年
英文名 :Western semi dry membrane fluid
库存 :756
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")Western半干转转膜液厂商,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:Western半干转转膜液厂商
产地:国产|进口
英文名:Western semi dry membrane fluid
规格:10×1L
编号:RFT079
品牌:百奥莱博
本Western半干法转膜液是一种安全无毒的转膜液,没有使用剧毒的甲醇,也没有使用其它的有毒试剂。配制Western 半干法转膜液的方法非常便捷,不需要调节pH值。本Western转膜液共1瓶,可以配制1升1×Western半干转膜液,用于Western时半干法电转膜。
使用方法:
1、取一瓶可以配制1升Western转膜液的粉剂,倒入到一洁净的烧杯中,加入蒸馏水到约700毫升,溶解。
2、再加入200毫升无水乙醇或210毫升95%乙醇,混匀。
3、然后在量筒中用蒸馏水定容到1升。混匀后即可使用,无需调节pH值。没有用完的转膜液可室温或4℃保存,通常两周内使用没有任何问题。当转膜液颜色变为浅棕色或黄褐色时,应该丢弃。
注意事项:
1、配制好的半干法转膜液可室温或4℃保存。配制好的半干法转膜液长期存放后,如果颜色变成浅棕色或黄褐色,应丢弃。
2、需使用分析纯级别的乙醇或纯度更高的乙醇。
储存条件:室温,有效期2年。
除Western半干转转膜液厂商外,我公司正在打折促销以下产品:
·高保真平末端pfu DNA聚合酶
编号:RFT101
英文名称:pfu DNA Polymerase
规格:100U(40μl)|5×100U(5×40μl)
本品是嗜热古细菌来源的DNA聚合酶,该酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外,还具有很强的3’-5’外切酶活性,增强了PCR扩增的保真度。与Taq酶相比,pfu聚合酶热稳定性更好,更能忍耐较高的变性温度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度为0.5kb/分钟。PCR产物3’端不带碱基A,为平滑末端,要通过平滑末端克隆法进行克隆。适用于高保真的DNA片段的扩增、DNA片段的平滑化。
试剂盒组成:
pfu DNA Polymerase(2.5U/μl)-————————40μl
10×pfu PCR buffer(含Mg2+)—————————1ml
活性定义:1单位(U) pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
贮存液:50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol
使用方法:
1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:
成分 | 20μl反应体系 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
Template | 0.04-0.2 μg | 0.1-0.5 μg | as you wish |
Primer 1(10μM) | 0.4μl | 1μl | 0.2μM |
Primer 2(10μM) | 0.4μl | 1μl | 0.2μM |
10×pfu PCR buffer(含Mg2+) | 2μl | 5μl | 1× |
dNTP Mixture(10 mM) | 0.4μl | 1μl | 200μM each |
pfu (2.5 U/μl) | 0.4μl | 1μl | 0.05U/μl |
ddH2O | up to 20μl | up to 50μl | - |
注1:如果需要改变Mg2+浓度,根据下表调节
PCR反应体系中Mg2+终浓度 | 2 mM | 2.5 mM | 3 mM | 4 mM |
20μl反应体系中25 mM MgSO4加入量 | 0μl | 0.4μl | 0.8μl | 1.6μl |
50μl反应体系中25 mM MgSO4加入量 | 0μl | 1μl | 2μl | 4μl |
注2:配制反应液时,请最后加入pfu,因为本酶有很强的3’-5’外切酶活性,有可能降解引物。
2、混匀后,离心快甩将反应液收集到管底。
3、PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。
4、PCR仪上执行以下程序:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
初始变性 | 94℃ | 3-5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 30 sec | 25-40* |
退火 | 50-60℃* | 30 sec | |
延伸 | 72℃ | 0.5kb/min* | |
最后延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
注:PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
注意事项:
1、pfu 酶具有 3’-5’的外切酶活性,所以 pfu 酶扩增时延伸速度远比 Taq 酶低,应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间,一般情况下 pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5kb;同时 pfu 酶的 3’-5’的外切酶活性可能降解引物,所以应最后把pfu 酶到反应体系中,并立即进行 PCR 反应。
2、pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好,对于 GC 含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃,对 pfu 酶的活性无影响。
储存条件:-20℃,有效期一年。
Western半干转转膜液厂商关键词:RFT079,Western semi dry membrane fluid,Western半干转转膜液
L-赖*酸甲酯盐*(代"酸")盐 DDD 26348-70-9
ARB12750 小鼠CD3分子(CD3)酶免分析 Mouse cluster of differentiation 3,cd3 ELISA KIT
ARB12833 小鼠天冬*酸*基转移酶(AST)Elisa方法检测 Mouse aspartate aminotransferase ,ast ELISA KIT
ARB14210 牛α干扰素(IFN-α)ELISA代测服务 Bovine interferon α,ifn-α ELISA KIT
ARB11884 人磷状癌细胞抗体酶联免疫定量检测 Human squamous cell carcinoma antibody ELISA KIT
ARB11414 人结肠癌抗原(CCA)定量分析 Human colon cancer antigen,cca ELISA KIT
3,5-二*-L-酪*酸 Diphenylaminesulfonic acid sodiu*(代"m") salt 300-38-9
HC0149 大龙吸头
ARB12288 大鼠抗中性粒/中心体抗体(ACA)检测服务 Rat anti-centrol and centrosome antibody,aca ELISA KIT
585-99-9 蜜二糖 Melibiose
还原型谷胱甘肽 Nuclear fast red 70-18-8
91079-40-2 Casein acids Hydrolysate 酸水解酪素
ARB12397 大鼠性激素结合球蛋白(SHBG)Elisa分析 Rat sex hormone-binding globulin,shbg ELISA KIT
2′-脱氧腺苷-5′-单磷酸二* Boc-Asp(Ochx)-OH 151151-31-4
ARB12641 大鼠游离三碘甲腺原*酸(TT3)ELISA检测服务 Rat tt3 ELISA KIT
ARB14173 小鼠流行性出血热IgM抗体(EHF IgM)酶标法分析
BL0614 琼脂糖凝胶6FF Sepharose 6FF
ARB11896 人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)检测服务 Human phospho protein kinase c,p-pkc ELISA KIT
2,4-二硝基*(代"*")甲*(代"酸") L-Lysine 610-30-0
ARB12092 大鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)elisa检测 Rat secreted phospholipase a2,spla2 ELISA KIT
4-硝基*(代"*")基-α-D-吡喃甘露糖苷 2-Sulfobenzoic anhydride 10357-27-4
ARB12699 大鼠糖皮质类固醇受体(GR)elisa检测操作说明书 Rat glucocorticoid receptor,gr ELISA KIT
Western半干转转膜液厂商关键词:RFT079,Western semi dry membrane fluid,Western半干转转膜液
·青链霉素溶液(100×)
编号:RFT181
英文名称:Penicillin-Streptomycin Solution
规格:100ml
青霉素-链霉素溶液(100×)是专门用于细胞培养的双抗,经过过滤除菌,可以直接添加到细胞培养液内。一个包装即100ml青霉素-链霉素溶液(100×)可以配制10L细胞培养液。
青霉素-链霉素溶液(100×)中,青霉素的含量为10KU/ml,链霉素的含量为10mg/ml。该溶液用0.85%*化*配制。在细胞培养液中推荐的青霉素的工作浓度为100U/ml,链霉素的工作浓度为0.1mg/ml,即按照100倍稀释使用即可。
使用方法:
1、在无菌的细胞培养液中直接添加青霉素-链霉素溶液(100X),比如按照每500ml细胞培养液添加5ml的比例加入青霉素-链霉素溶液(100X),混匀即可使用。
2、配制细胞培养液时加入青霉素-链霉素溶液(100X),然后再过滤除菌。配制细胞培养液时按照每配制1L细胞培养液加入10ml的比例加入青霉素-链霉素溶液(100X),配制完成后过滤除菌即可使用。
储存条件:-20℃。
·T4连接酶
编号:RFT168
英文名称:T4 DNA ligase
规格:100U
本T4 DNA Ligase是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的,催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接,还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接,以及线性DNA的自身环化。
产品组分:
T4 DNA ligase (5U/μl)————————100 U (20μl)
10×T4 DNA Ligation Buffer——————0.2 ml
50%PEG Solution————————————0.15 ml
活性定义:此酶的活力单位为Weiss Unit。1个Weiss Unit相当于约200个粘性末端连接单位(cohesive-end ligation unit, CEU)。1个CEU单位定义为在20μl的连接反应体系中,在16℃30分钟内,能使50%的经HindIII消化的λDNA片段连接所需的酶量。
注意事项:
1、T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量,否则影响连接效率。
2、PEG可以极大提高平末端的连接效率,我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3、为了提高转化效率,转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油,比较粘稠容易挂壁,建议使用前短暂离心将液体收集到管底,取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。
储存条件:-20℃。
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