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文献和实验
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保存条件 ：低温运输
保质期 ：长期
英文名 ：Single Cell RNA Amplification Kit
库存 ：945
供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京单细胞RNA扩增试剂盒大量库存促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京单细胞RNA扩增试剂盒大量库存促销，产品信息：
类别：克隆与表达
英文名：Single Cell RNA Amplification Kit
| 产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
| 单细胞RNA扩增试剂盒 | BTN130551 | 80次 |
品牌：百奥莱博
规格：80次
英文名：Single Cell RNA Amplification Kit
产地：国产|进口
一个哺乳动物单细胞一般只有约10pg的总RNA，其中的mRNA 只有1-5%(约10E5-10E6个分子),因此直接用单细胞进行mRNA扩增具有极大的技术难度。本公司进过精心研究，整合最新技术，开发出了可以直接用单个细胞进行mRNA扩增的试剂盒，其原理如下(仅以扩增mRNA 链为例)：
产品特点：
1. 双向，既可用于制备正义的mRNA，也可用于制备反义的aRNA(antisense RNA)或cRNA(complimenary RNA)。
2. 直接用单细胞裂解液进行反应，免RNA提取，整个过程只需要半天。
3.适用于多种单细胞，包括卵细胞、干细胞、FACS分离细胞等单细胞，还可用于培养细胞和胚胎等实体租组织(需要单细胞化)，也可以使用10pg-10ng 纯化的总RNA作为模板。
4. 假阴性和假阳性率均小于6%，RNA扩增成功率为90%。
5. 所得mRNA或aRNA(cRNA)可以直接用于后续的RT-PCR、芯片杂交、表达谱分析等实验。
6. 本试剂盒足够对80个单细胞进行单细胞RNA扩增。
| 成分 | 规格 |
| P1(cDNA一链合成引物) | 360μl |
| P2(cDNA 二链合成引物) | 360μl |
| P3(T7-cDNA 二链合成引物) | 100μl |
| 溶液A(4×细胞裂解液) | 100μl |
| 溶液B(RI) | 10μl |
| 溶液C(逆转录酶) | 40μl |
| 溶液D | 10μl |
| 溶液E | 10μl |
| 溶液F | 150μl |
| 溶液G(TdT) | 60μl |
| 超纯水 | 10μl |
| PCR 3.0 | 9ml |
| 转录预配液，2× | 500μl |
| T7 RNA聚合酶 | 50μl |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
强烈建议首次使用本产品前，先预实验，用纯化好的任何总RNA 10倍系列稀释，直到浓度为25pg/μL，然后用0.4μL(即10pg RNA，相当于单个细胞的总RNA量)按本操作说明书进行扩增，一次需平行做4-10个重复。
下列步骤仅用于制备mRNA，如果需要制备aRNA(cRNA)，则需要把P1和P2引物对换，其他成分不需要做任何改动。
一：新鲜准备工作液
见手册左侧各表，据此配制的的各工作液足够扩增10个单细胞用。如果一次实验没有10个细胞，工作液的量仍需按10个细胞的用量新鲜配制，冰上放置时间不能超过1小时。
二：准备单细胞悬液
如何制备单个细胞取决于实验样品和所能使用的仪器设备，此处所列步骤仅供分离单个培养细胞的参考，本试剂盒不提供相关试剂。对其他材料(如干细胞克隆、2-8细胞胚胎、胚囊、胚胎组织等)用户需自行选用合适的制备单细胞的方法。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞(如FACS分离细胞、卵细胞等)，则可以跳过此步直接进入下步操作)：
1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于培养基中并计数。
2.转移100-4000个细胞到离心管中，400g离心4分钟，弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于50μL自备PBS中，使其终浓度为2-80个细胞/μL，所得细胞悬液可直接用于下面的反应。本方法一个管中可以处理1-40个细胞，但这些细胞必须是先分离成独立细胞的，不能是未分离的细胞团。
三：cDNA 合成和PCR扩增
4. 标记10个0.5mL PCR管(10 号设为阴性对照)，按下表加入各成分：
| 成分 | 1-10 号样品管 |
| RT工作液(按下表1 配) | 每管加4.0μL，共10管 |
| 细胞样品(来于第3 步)或10pg-10ng/μL纯化的RNA | 1-19号加0.5μL样品(1-40个细胞)，10号用0.5μL水代替 |
| ·70℃水浴90秒，转冰上放置1分，短暂离心 | |
| 溶液C(试剂盒提供) | 每管加0.5μL，共10管 |
| ·总反应体系为5μL，37℃水浴90m，70℃水浴10m，冰上放置1分钟，短暂离心 | |
| Tailing预处理液(按下表2 配) | 每管加1μL，共10管 |
| ·短暂离心后PCR 仪上37℃ 30m，再80℃ 25m，离心后放冰上1m | |
| Tailing工作液(按下表3配) | 每管加6μL，共10管 |
| ·短暂离心后37℃15分钟，70℃10分钟，放冰上1分钟 | |
| ·上步反应管中每个取3μL分别加入2个新PCR管做模板，共分得20个PCR管。每个反应管中剩约6μL，作未PCR对照放-20℃待用。 | |
| 引物+水混合液(按下表4 配) | 每个PCR管加12μL，共20管 |
| PCR Mix 3.0 | 每管加15μL，共20管 |
| ·按(95℃3分，50℃2分，72℃3分)参数循环1次，冰上放1分 | |
| P2 | 每管加1.5μL，共20管 |
| 自备PCR级石蜡油 | 若PCR 仪无热盖，则每管加50μL |
| ·(95℃30秒，67℃1分，72℃3分，每次循环后在72℃的时间增加6秒)循环20次，4℃放置 | |
5. 将模板来于一个样的2 管PCR产物汇集，20 管汇集后将得10 管(对应于10个样)，每管30μL。只有循环数在24次以上时电泳才能检测到PCR产物，故此步不需要电泳检测。
6. 用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，去除残留的引物，50μl 洗脱DNA，产物放-80C 长期保存。
7. 10个样和其对应的未PCR 对照(共20个样)各取0.5μL 为模板进行PCR或定量PCR分析，判断靶基因在哪个样品中得到了扩增和扩增效率如何。没有靶基因的可以选择看家基因。客户需自备相关引物和试剂。
四：制备含T7启动子的模板(下列操作只针对10个样品中的一个)
8. 选一个靶基因得到扩增的DNA样品(第6 步回收所得)，各取1μl 加到10个PCR 管中，各加29μl 新鲜配制的PCR Mix(按下表5 配)，混匀后按以下参数扩增1次(95℃ 5m30s，64℃ 1m，72℃ 5m18s)，再按以下参数扩增8次(95℃ 30秒，67℃ 1m，72℃ 5m18s，每次循环后将72℃延伸时间增加6秒)，PCR结束后在72℃保温10m。
9. 汇集10 管PCR反应液(共300μl)，用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，30μl 洗脱。
10. 将30μL洗脱DNA全部上样到琼脂糖胶上进行电泳(只要电泳10分钟即可，否则胶体积太大，回收效率低)，360nm紫外灯下切胶(250bp以上区域)，最后用30-50μL 洗脱。此步所得PCR片段无250bp以下的非特异扩增产物，可直接用于后续体外转录。
五：T7 体外转录：请按该试剂盒的使用说明书操作(本产品含体外转录试剂)。
表1:RT工作液
| 成分 | 用量 |
| 超纯水 | 30.8μl |
| 溶液A | 11μl |
| 溶液B | 1.1μl |
| P1稀 | 1.1μl |
| 合计 | 44μl |
注：P1 稀是将1μl P1加入到100μL超纯水新鲜配制后得到，需新鲜配制。用户可在此步加入自备的内参，但超纯水的用量要相应减少。如加入2μL内参，则少加2μL 水。
表2:Tailing预处理液
| 成分 | 用量 |
| 超纯水 | 8.8μl |
| 溶液D | 1.1μl |
| 溶液E | 1.1μl |
| 合计 | 11μl |
表3:Tailing工作液
| 成分 | 用量 |
| 超纯水 | 42.9μl |
| 溶液F | 16.5μl |
| 溶液G | 6.6μl |
| 合计 | 66μl |
表4:引物+水混合液
| 成分 | 用量 |
| 超纯水 | 231μl |
| P1 | 33μl |
| 合计 | 254μl |
表5:PCR Mix
| 成分 | 用量 |
| 超纯水 | 132μl |
| P1 | 11μl |
| P3 | 11μl |
| PCR 3 | 165μl |
| 合计 | 319μl |
北京单细胞RNA扩增试剂盒大量库存促销专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司
关键词：BTN130551,Single Cell RNA Amplification Kit,单细胞RNA扩增试剂盒
单细胞RNA扩增试剂盒的纯度及用途：纯度高质含量低，适用于研究和配制标准液； 纯度较高，杂质含量较低，适用于定性和定量分析 重量略低于二级试剂，用途近似二级试剂 化学试剂按纯度由低到高可分为工业纯、实验纯（LR）、化学纯（CP）、分析纯（AR）、优级纯（GR）和超纯等多种规格。
想要了解更多关于北京单细胞RNA扩增试剂盒大量库存促销的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：
| 编号 | 类别 | 名称 |
| BTN130986 | 核酸扩增(PCR) | 即用型热启动PCR试剂盒 |
| BTN121104 | 细胞组织染色 | 改良型天狼猩红染色试剂盒 |
| BTN100874 | 核酸电泳和回收 | DNA尿素-PAGE上样液 |
| BTN60705 | DNA纯化 | 一管式植物DNA提取试剂盒 |
| BTN91104B | 探针标记及检测 | Denhardt溶液(非同位素探针) |
| BTN100942 | 核酸扩增(PCR) | 单孢子全基因组扩增试剂盒 |
| BTN90805 | 核酸扩增(PCR) | 即用型PCR试剂盒(含染料) |
| BTN70102C | 蛋白质研究 | 蛋白marker(43～200kD) |
| BTN61203 | 核酸扩增(PCR) | PCR级高GC的DNA清除剂 |
| BTN100911 | 蛋白质研究 | 长效期SDS-PAGE上样液 |
| BTN100833 | 蛋白质研究 | PMSF溶液(10mg/mL) |
| BTN100303 | DNA纯化 | 柱式真菌DNA提取试剂盒(玻璃珠法) |
| BTN130983 | RNA纯化 | RNase喷雾清除剂 |
| BTN60305 | RNA纯化 | 真菌RNA提取试剂盒 |
| BTN100813 | 干粉培养基 | SOB培养基 |
| BTN160101 | 克隆与表达 | pUCm-T载体 |
| BTN130308 | 核酸扩增(PCR) | 一管式双链cDNA合成试剂盒 |
| BTN131282 | 其他细胞生物学试剂 | 多聚甲醛-磷酸缓冲固定液 |
| BTN131114 | 蛋白质研究 | ABTS溶液(7mM) |
| BTN101123 | 蛋白质研究 | PVDF膜(0.45μm，13×20cm) |
| BTN130528 | 蛋白质研究 | 植物专用蛋白酶抑制剂 |
| BTN71202 | RNA纯化 | 血液RNA柱式提取试剂盒 |
| BTN120684 | 克隆与表达 | 噻孢霉素溶液 |
| BTN60605 | 其他生化试剂 | 20%PVP K30溶液(不含RNase) |
| BTN90508 | 蛋白质研究 | 包涵体微量纯化试剂盒 |
| BTN130906 | 探针标记及检测 | 超级杂交液(原位杂交) |
| BTN60910 | DNA纯化 | 非冻型血液DNA保存液 |
| BTN100936 | 基因结构和功能 | 人甲基化/非甲基化DNA标准品 |
| BTN81203 | 蛋白质研究 | SDS-PAGE电泳液(干粉) |
北京百莱博科技有限公司是克隆与表达产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购北京单细胞RNA扩增试剂盒大量库存促销。
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