北京DNA探针变性液哪里卖价格_品牌:百奥莱博-丁香通官网

保存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

保质期：长期

英文名：DNA Probe Denaturation Solution

库存：260

供应商：北京百奥莱博科技有限公司

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京DNA探针变性液哪里卖，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京DNA探针变性液哪里卖
编号：BTN131208
品牌：百奥莱博
规格：10mL
英文名：DNA Probe Denaturation Solution
产地：国产|进口
杂交反应进行时，探针和靶核酸都必须是单链的。如果用双链DNA探针进行杂交(包括检测RNA时)，双链DNA探针在杂交前必须进行变性。本产品就是即用型的DNA探针变性液，专门针对DNA探针在杂交前进行变性处理。

产品特点：
1. 即开即用。
2. 使用方便快捷，可用于核酸杂交。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

一、根据探针和靶分子的不同，分别按下面不同情况计算杂交分子的Tm 值
1. 对 DNA-DNA杂交，其Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+] + 0.41×GC%–500/L
说明：L是探针或靶分子的长度(用两者中最短的一个)
GC%是探针或靶分子中的GC 百分比(用两者中最短的一个)
Na+浓度是超级杂交液中Na+的浓度，为0.75 M，16.6×log10[Na+]=(-2.07)
2. 对 DNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高10-15℃。
3. 对 RNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高20-25℃。
4. 对 Oligo探针杂交，Tm=GC 数量×4℃+AT 数量×2℃。

二、确定最佳杂交温度(预杂交温度跟杂交温度应该一样)
1. 对于大于200bp的DNA-DNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃，一般选择68℃。
2. 对 RNA-RNA或DNA-RNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃。
如果这样计算出的杂交温度很高(如高于70℃)，则RNA 容易降解，所以最好选用含甲酰胺的超级杂交液(超级杂交液B型)，以便能在42℃完成杂交。
3. 对 Oligo探针的杂交，最佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo 较短，更容易受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等)，所以最佳温度需要适度摸索和优化。

三、确定洗膜温度
一般使用0.1×SSC做洗膜液，在此条件下的最佳洗膜温度比Tm低5-12℃，一般情况下可以在55℃进行洗膜。Oligo探针可以室温洗膜。

四、预杂交步骤
预杂交就是用不含探针的超级杂交液跟印迹膜进行孵育，其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭，否则这些位点会吸附标记的探针，造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6×SSC溶液中，使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋最好预先封口，再剪掉一角，留一个小口)，按每平方厘米印迹膜加0.2mL超级杂交液的比例沿小口加入超级杂交液，然后用塑料封口机将口封牢。
3. 将此塑料袋浸没入温度设定在最佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中，保温1-2小时，延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中，使超级杂交液与印迹膜充分接触。

五、杂交步骤
1. 如果标记的探针是双链核酸，则需经变性处理。具体操作是：根据探针浓度和杂交所需探针的量计算出所需的探针体积，取出所需体积的探针到一干净的硅化的塑料离心管中，加入等体积的本产品，吹打混匀后室温放置5分钟变性后，将探针样品放入冰浴中冷却，加入0.05倍体积的自备的1 M的Tris-Cl溶液(pH7.2)以及等体积的自备的0.4 M的HCl溶液。
将探针样品保存在冰浴中直至需要。如果是单链DNA或RNA探针，则不需变性，直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪刀剪一小口，加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率而定，一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因，探针的加入量应加大，而对于检测克隆的基因片段，则探针的量可减少。如果是放射性探针，应将此塑料袋套在另一塑料袋之中，以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3.在选定的杂交温度下继续保温，时间一般为6-12小时。

六、洗膜步骤。
注意在下面的所有操作过程中，一定不要使印迹膜干燥。此步是将与印迹膜非特异结合的探针分子洗去而只留下特异结合的探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低，热稳定性较差，在一定的温度和较低的离子强度下，即可洗掉。
1.杂交完毕，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含探针的杂交液。此含探针的杂交液可以多次使用再倒弃。
2. 剪开杂交袋，用镊子取出印迹膜，浸没于大量的2×SSC(含0.5 % SDS)溶液中，室温下振荡漂洗15分钟。
3. 重复上步操作一次。
4. 将印迹膜转移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中，在计算好的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。
5. 重复上步操作一次。如果是同位素标记探针，则需要重复至用盖革计数器在无核酸区域检测不出放射信号为止。
6. 将印迹膜转移到滤纸上，吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测。

我公司的北京DNA探针变性液哪里卖，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·改良Lowry法蛋白定量试剂盒
编号：BTN101102
英文名称：Enhanced Lowry Assay Kit
规格：1000次
Folin酚试剂(磷钼酸和磷钨酸混合物)跟蛋白质中含酚*基酸(色*酸和酪*酸)发生颜色反应，可用于测定蛋白质浓度，但灵敏度较低。Lowry在此基础上加入Biuret(双缩脲)反应步骤，即先在碱性条件下使蛋白质和Cu+形成复合物，再使其与Folin酚试剂发生显色反应，产物在750nm检测。
Lowry法使不含酚的蛋白质也能被检测出来，灵敏度是单独使用Folin酚的10倍左右，是双缩脲反应的200倍，因此成为早期检测蛋白浓度的主要方法。传统Lowry法受到很多常用的试剂(如DTT、糖、甘油、Triton等)干扰，步骤繁琐。本公司对Lowry法进行改良。
Lowry检测原理图如下：

产品特点：
1．即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
2．能抵抗部分干扰物(如一定浓度SDS或其他去污剂)的干扰。
3．检测线性范围广，在2-100μg，检测上限比经典Lowry法高30%-40%。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A成分一	208ml
溶液A成分二	16ml
溶液A成分三	16ml
溶液B	80ml
溶液C	80ml
福林酚	10mL(用100mL 棕色瓶)
BSA标准品(2mg/mL in水)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(但BSA 标准品需要-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一、准备工作
1．制备溶液A：将16mL溶液A成分二和16mL溶液A成分三加入到装溶液A成分一的塑料瓶中，混合均匀得到240mL溶液A。注意：溶液A各成分分开提供更加稳定。
2．制备 Lowry工作液：将溶液A、溶液B和溶液C按3：1：1的体积比混合得到Lowry工作液。此工作液可以室温放置2-3周，所以最好用多少配多少。如果发现溶液B或溶液C有沉淀，需37℃溶解并摇匀后再使用。
3．制备福林酚工作液：在装有10mL 福林酚的棕色塑料瓶中加入90mL 去离子水，摇晃混匀待用。此工作液在避光条件下可以放置6个月。

二、试管法
4．先用去离子水将BSA 标准(2mg/mL)稀释到50μg/mL，然后在标记的试管中加入下列成分(单位：μL)。注意：每个样品最好做三个稀释度，每个稀释度最好设置三次重复，阴性对照和标准品也最好做三次重复。

标准品(每个做三次重复，此处只列出一个)
编号	BSA 标准(50μg/mL)	水	总体积
阴性对照	0	0	200
1	0	200	200
2	25	175	200
3	50	150	200
4	100	100	200
5	150	50	200
6	200	0	200

样品(以1个样品、3个稀释度为例，每个稀释度三个重复，此处只列出一个)
编号	样品	总体积
1	200(稀释度1)	200
阴性对照1	200(用稀释度1稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200
2	200(稀释度2)	200
阴性对照2	200(用稀释度2稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200
3	200(稀释度3)	200
阴性对照3	200(用稀释度3稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200

5．每管中加入200μl Lowry工作液，振荡混匀后室温反应10分钟。
6．每管中加入100μl 福林酚工作液，振荡混匀后室温反应30分钟。
7．用容量为0.5mL、光径为1 cm的玻璃比色杯或聚*乙*(代"烯")比色杯测定750nm的光吸收。测定时，先空白(即阴性对照)后样品，测定样品和BSA标准品时，先低浓度后高浓度。测定未知样品前需要将杯子清洗干净，必要时可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。
8．根据标准品三个重复的平均值绘制标准曲线，然后根据未知样品的光吸收从标准曲线中查得其对应的浓度。

三、96微孔板法
9．同上，只是反应用96 微孔板设置，用酶标测试仪750nm 测定光吸收。

四、样品中干扰物质的去除(本产品不含相关产品，如果样品中有干扰Lowry法蛋白定量的物质(见附表)，可另购本公司的微量蛋白质沉淀试剂盒(BTN81217)去除，也可以用自备试剂按下法去除：用水将样品调到体积为200μl，加入20μl 0.15%去氧胆酸*，混匀，室温放置10分钟。加入20μL 72%的TCA，室温放置5分钟。3000 g离心15分钟，小心去除上清。用200μl水溶解蛋白沉淀后以用于Lowry法测定。
附：常见Lowry法蛋白定量干扰物(低于所列浓度不干扰，高于所列浓度则会干扰，需要按上法去除。不能含任何浓度的DTE，DTT和硫*(代"酸")胺)。

干扰物	浓度	干扰物	浓度
Acetone	10%	2-Mercaptoethanol	1mM
Aprotinin	10mg/mL	NaCl	1 M
CHAPS	0.05%	NaOH	100mM
DMF	10%	NaPi	100mM
DMSO	10%	NP40	0.02%
EDTA	1mM	PMSF	1mM
EGTA	1mM	SDS	1%
Ethanol	10%	Sodium Citrate	100mM
Glucose	100mM	Sucrose	7%
Glycin	100mM	Tris	10mM
HEPES	1mM	Trition X-100	0.03%
Imidazole	25mM	Tween 20	0.05%
Methanol	10%	Urea	3M

疑难解答：
1. 该方法检测的蛋白质浓度范围1μg～50μg/ml。
2. 由于Lowry法测定的是蛋白质中酪*酸残基，对于那些酪*酸残基数高于或低于BSA,其测定的蛋白质含量将偏低或偏高。如果遇到该情况，需要采用BCA或Bradford法测定。
3. 阅读测定方法后化学试剂对测定方法的影响。

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