非冻型血液RNA保存液现货促销价格_品牌:百奥莱博-丁香通官网

保存条件：室温运输及保存

保质期：两年

英文名：RNAhold Blood RNA non-freezing preservation solution

库存：418

供应商：北京百奥莱博科技有限公司

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")非冻型血液RNA保存液现货促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：非冻型血液RNA保存液现货促销
英文名：RNAhold Blood RNA non-freezing preservation solution
编号：BTN111202
品牌：百奥莱博
由于血液富含RNase，因此血液RNA非常容易降解，是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题，本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上，开发了本产品。

产品特点：
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内，抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天，4℃可放置5天，-20℃可放置3个月。
2. 操作简单，直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3.适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液，不适用于陈旧血液和冻凝血液，也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好，效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本公司血液RNA提取试剂盒提取RNA。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：
注意：RNase污染无处不在，最好用本公司的高效无毒固相RNase清除剂处理RNA工作区域，千万不要使用烷基化试剂DEPC(相当于芥子*(代"气"))。

一:以白细胞为材料的保存方法(此法效果好于全血保存法)
1.室温1500-2000 g离心新鲜抗凝血液10-15分钟，最上层为血浆，最下层为红细胞，中间层为膜状的、含白细胞的Buffy Coat(含白细胞多的血液此层可能很厚)。
2. 吸出血浆后，小心将中间的白细胞层吸出(允许污染部分红细胞)到新的离心管中，加入5-10倍体积的本产品，混匀后放常温(不超过30℃)保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜，然后再离心去除保存液，最后再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶会刺破白细胞，释放出其中的RNA，在后续实验去掉上清时会丢失)。

二：以EDTA抗凝全血为材料的保存方法
3. 将血液取到EDTA抗凝管中后，迅速将0.5mL血液与1.5mL本产品混合，充分颠倒混匀，然后放常温(不超过30℃)保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜，然后再离心去除保存液，最后再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶会刺破白细胞，释放出其中的RNA，在后续实验去掉上清时会丢失)。

三：血液RNA的提取(本产品不含RNA提取试剂。此处以本公司的跟Trizol相当的动物RNA提取试剂盒操作步骤为参考。用户也可以使用其他RNA纯化试剂)
4. 提取RNA时，如果保存的白细胞在-20℃，则需要先室温化冻，如果保存在常温或4℃，则直接使用。
5. 取1.8mL混合液到新的2mL离心管中，5000g室温离心1分钟。
6.小心吸弃上清液(本产品)，细胞将形成沉淀(如果样品时全血，沉淀中将含有大量血液蛋白)。注意：上清一般会很浑浊，一定要尽可能弃尽。有时沉淀上面有白色晶体出现，属于正常现象。
7.在细胞沉淀中加入动物RNA提取试剂盒 1mL溶液A，剧烈震荡30秒(不能感觉到震荡即可，一定要看见管底液体旋转起来，否则只是液体表面的震动，下同)。震荡后颠倒几次看溶液是否均匀，如果有颗粒状物体说明还需要震荡裂解。
8.室温放置5分钟以使细胞充分裂解。
9. 将0.2mL自备的*仿加入到离心管中，剧烈震荡30秒。
10. 12000～15000g4℃离心3分钟。一般上清为无色的水相(含RNA，约0.5-0.9mL)；中间层为白色，含有DNA、蛋白质和其他细胞破碎物，不要触及；下层为有机相，一般呈深红色。注意：有时水相比重大于有机相，出现反相现象，此时应该取下面的水相。
11.小心将水相转移到另一自备的1.5mL塑料离心管中。如果水相超过0.75mL，则需要分成2管，否则在下步没法加入等体积的异丙醇。
12. 加入等体积的异丙醇到水相中，充分颠倒混匀。
13. 12000～15000g4℃离心10分钟沉淀RNA。
14. 吸弃上清。注意：如果离心后出现两个相，则需要吸弃上面的一相，然后在下相(含RNA)中加入一倍体积的超纯水和一倍体积的异丙醇，混匀后12000～15000g4℃离心10分钟沉淀RNA，吸弃上清。
15. 将75% RNase-free乙醇加入到RNA沉淀中，震荡几秒后12000～15000g4℃离心1分钟。
16. 弃上清
17. 12000～15000g4℃离心半分钟，用移液枪去除残留的液体。
18. 将20-50μL DEPC处理的水加入到沉淀中并吹打溶解，立即用于下述完整性、产率和纯度的检测，也可直接用于后续RT-PCR等试验或存放于-80℃待用。

四: RNA的检测(列出步骤仅供参考，本产品不提供相关产品)
19. RNA完整性的电泳检测：强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶中单链RNA分子会自生折叠成各种形状，尤其不能使用DNA上样液，因为没有经过去RNase处理。
20. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA用TE缓冲液(pH8.2)稀释10倍后检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA产率一般为2-5μg/mL。
21. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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*检测试剂盒(Calmagite微板法) 100T
SJ0298 Glufosinate-ammonium 草铵膦
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·即用型高保真PCR试剂盒
编号：BTN90708
英文名称：Instant HiFi PCR MasterMix
规格：1.5mL
本产品是即用型的2×高保真PCR预配反应液，含有除引物、模板以外的所有PCR试剂，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等，特别适合于高保真PCR反应。

产品特点：
1. Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。
2. 使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便，简化了PCR的准备工作。
3. PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少，有利于减少污染，降低实验误差。
4. 本产品A型含电泳染料，PCR反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。
5. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验，得到的PCR产物可用于平末端克隆。

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

使用方法：
将本产品与用户自备的模板，引物混合液按下列推荐使用量(30μL反应体系)加入PCR 管中即可进行PCR，反应结束后直接取5-15μL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30μL，各成分需要按比例增加或减少。

试剂		加入量
2×高保真PCR MagicMix		25μL
DNA模板(自备)	哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
	酵母基因组DNA	5-500ng
	细菌基因组DNA	0.5-50ng
	质粒DNA	5-500ng
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自备)		10-20pmol each
补水到		30μL

参考扩增条件：

预变性	94℃	4min
PCR(30个循环)	94℃	30s
	50℃	30s
	68℃	0.5kb/min
延伸	68℃	10min

注意事项：
1. 本产品的Pfu DNA聚合酶比Taq DNA聚合酶的延伸反应速率低，因此我们推荐的扩增延伸反应时间为每kb 需2 分种。
2. Pfu酶3´-5´外切酶活性可降解引物，所以强烈建议在冰上配置完成PCR反应液后，立即放入PCR 仪中进行扩增，扩增完毕后立即进行电泳检测。
3. 本产品扩增产物为平末端，不可以直接进行TA 克隆，可以使用ClionB载体(BTN51104)进行克隆。如需要进行TA克隆，建议对PCR产物纯化后，用加A 试剂盒(BTN60105)加A后再进行TA克隆。
4. 由于Pfu 无 5´到 3´外切酶的活性，所以本试剂盒不能用于实时荧光PCR。

疑难解答：
Q：为何Pfu DNA Polymerase扩增效率不如Taq DNA Polymerase？
A：一是由于Pfu DNA Polymerase 具有3´-5´的外切活性，所以在合成过程中，该酶会随时校对新添加的核苷酸是否配对，影响了合成效率；二是它能通过3´-5´的外切活性使引物部分降解，降低引物结合模板的能力，进而影响扩增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
Q：使用本产品时还有哪些注意事项？
A：1.引物长度和浓度一般应比常规的PCR 长和高(考虑到被Pfu DNA Polymerase的3´-5´的外切活性降解的因素)；
2.最好在反应前加Pfu DNA Polymerase。

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·Dicer(RNase III)
编号：BTN130676
规格：200U
Dicer(RNase III)能在含有锰离子的反应缓冲液中，将较长双链RNA切割成一组由18-25bp组成的小片段干扰RNA(siRNA)，更适合用于哺乳动物细胞的RNA干扰实验。用1.5个单位(1μl)的Dicer(RNase III)能够将1μg的dsRNA完全切割成siRNA，其反应图如下：
Dicer(RNase III)反应示意图

产品特点：
1．为RNA干扰研究提供siRNA；
2．基因沉默；
3．靶标确认；
4．去除dsRNA；
5．无核酸内切酶和外切酶污染。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期两年。

活性定义：1单位指50μl的反应体系中，37℃条件下，20分钟将1μg dsRNA切割成siRNA所需要的酶量。