DTT(蛋白级)现货价格

保存条件 ：低温运输

保质期 ：长期

英文名 ：DTT，Protein Grade

库存 ：274

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")DTT(蛋白级)现货价格，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：DTT(蛋白级)现货价格
英文名：DTT，Protein Grade
编号：BTN131053
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：5g
本产品是用于还原蛋白质二硫键的水溶性试剂。维持单硫醇的还原状态并可定量还原二硫键。 使用DTT和Ellman 试剂可以特异、灵敏地分析二硫键。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

我公司的DTT(蛋白级)现货价格，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·红细胞裂解液A型(核酸纯化)
编号：BTN60403
英文名称：Red Cell Lysis Solution,Type A
规格：250mL
本品用于快速裂解哺乳动物全血中的红细胞而基本不破坏白细胞和其他淋巴细胞的完整性。由于红细胞是血液的主要细胞成份，不含DNA和RNA，其所含血红素能抑制PCR反应，所以先用本产品裂解红细胞，再提取基因组DNA或RNA 有助于提高所得样品纯度。

产品特点：
1.快速，一次处理只需要2-3分钟。处理后提取血液DNA可以不需要酚/*仿去蛋白质。
2.高效，一次处理能裂解80%以上的哺乳动物红细胞，一般样品最多只需要处理两次。
3.扩容性好，可以一次处理多达几十毫升的样品，也可以处理100μL的血液。
4. 兼容性好，可以与市场上大多数血液DNA提取试剂盒结合使用。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在装有抗凝血液的离心管中，按1:1的比例加入红细胞裂解液A型并轻柔颠倒混匀。
2. 5000-10000 g室温离心2分钟，小心吸弃弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于1/2 体积的红细胞裂解液A型中，轻柔吹打混匀后5000-10000g室温离心2分钟。
4.沉淀即为去除了红细胞的血液细胞，可以直接用于后续的实验。


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·pUCm-T载体
编号：BTN160101
英文名称：pUCm-T vector
规格：1μg
本产品是一种高效克隆PCR产物(TA Cloning)的专用载体。本载体由pUC系列载体改造而成，在pUC载体的多克隆位点处插入特殊的限制性内切酶识别位点，酶切后能在载体的3´端形成悬挂的“T”末端。很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA 每条链的3´端加上一个突出的碱基A。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT 配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到，pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片断的重组克隆，大大提高了3´末端A 突出PCR产物的连接、克隆效率。本产品应用于进行TA 克隆，克隆PCR产物。对克隆后的PCR产物可以用M13通用引物进行DNA 测序。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一. 实验准备
1. PCR产物3´末端带有突出的A碱基：Taq、Tth、Ampli Taq、Klen Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物3´末端均带有突出的A碱基。建议扩增的PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行回收，再进行连接转化实验。
2. PCR产物3´末端没有突出的A碱基：Pfu、Pwo、Tli或DeepVent等DNA聚合酶具有3´5´外切酶活性，其扩增的PCR产物末端可能不带有3´A，要对这种平末端PCR产物进行克隆，应先对其进行3´末端加A，再进行连接转化实验。

二.连接反应
3.在一个标准的10mL连接反应体系中，加入下列成分：

 

反应组分	10μl反应体系
插入的目的片段	xμL(0.2 pmol)
本产品	1μL(50 ng)
10×连接酶缓冲液	1μL
T4 DNA连接酶	3-5 U
补水到	10 L

 注意:一般最后加入T4 DNA连接酶。
4. 用移液器吹打反应混合液使之混匀后，16-23℃连接1～12小时(或按T4 DNA连接酶供货商提供的操作手册进行连接)。

三．细菌转化和鉴定
5. 将100μl感受态细胞置于冰上解冻后，完全解冻后轻轻将细胞均匀悬浮。
6. 加入上述5μl连接液，轻轻混匀，冰上放置30分钟。
7. 42℃水浴热激90秒，再冰上放置15～20分钟。
8. 加入400μl自备的SOC培养基，37℃ 200～250rpm振荡培养1小时。
9. 4000rpm离心5分钟，用枪头吸掉400μl上清液，用剩余的培养基将细胞悬浮。
10. 将细菌悬液均匀涂布在含20μl的IPTG(100mM)和100μl的X-gal(20mg/mL)的*苄青霉素抗性的自备的LB平板上。(涂布菌液的用量可以根据连接的效率及感受态细胞的转化效率而进行适当的调整。)
11. 将平板于37℃培养1小时，然后倒置培养过夜。(先将平板正向放置1小时，以吸收过多的液体。)

四．筛选
12.转化子的蓝白筛选：
 当外源DNA片段插入到pUCm-T载体中后，由于外源DNA的核酸序列存在改变了LacZ基因的编码，从而影响了其产物β-半乳糖苷酶α-片段的活性，因此重组克隆在-gal/IPTG 平板上呈现为白色，而非重组克隆呈蓝色。选择在IPTG/X-gal 平板上生长的白色菌落，用牙签挑至含*苄青霉素的液体培养基，37℃培养过夜。
13.转化子的鉴定：
1)用上述培养的白色菌落的菌液抽提质粒，用PstI单酶切或用其它合适的酶切,琼脂糖凝胶电泳检查片段大小，确定是否含有目的片段。
2)用M13通用引物或其它合适的引物直接进行测序来确定是否含有目的克隆。

操作提示：
1. PCR产物的纯度：
 连接反应前需用琼脂糖凝胶电泳检测PCR反应产物，如果电泳检测PCR产物条带弥散，或出现非特异条带，则需要切下目的条带，用胶回收试剂盒对目的片段进行回收。若PCR产物电泳检测只有预期大小的明显条带，也应使用PCR产物纯化试剂盒直接纯化PCR产物，以除去引物二聚体。不经纯化的PCR产物在某些条件下可直接用于连接，但由于引物二聚体和PCR产物中其它物质的影响，造成含有插入片段的阳性克隆数减少，因而需要筛选很多克隆方可得到含有目的PCR产物的阳性克隆。
2. 平端PCR产物
 具有校正活性的热稳定性DNA聚合酶如Pfu、Pwo、Tli在进行PCR扩增时产生平端PCR产物。这种平端PCR产物可以进行3´末端加A 尾后连接到pUCm-T载体中，采用这种方法进行连接，可大大提高克隆的效率。
3.优化插入片段和载体的摩尔比
1)pUCm-T载体优化的插入DNA片段和载体的摩尔比为3:1，采用3-10:1的连接比例也可成功进行连接。如果你的PCR产物开始连接的不理想，则有必要优化连接比例。
2)PCR产物的量可采用以下公式进行换算：
PCR片段的量(ng)= [加入载体的量(ng)×插入片段大小(kb)/载体大小(kb)]×插入片段和载体的摩尔比
4.筛选含插入片段的转化子
插入片段成功克隆到pUCm-T载体中，可阻断β-半乳糖苷酶的编码序列，因而重组克隆可在指示培养基上通过颜色进行筛选。大多数情况下含有PCR产物的克隆菌为白色，如果PCR片段和LacZ基因在同一读码框内，即PCR片段碱基数是3的整数倍(含3´-A)，并且读码框无终止密码子，则重组克隆菌可能为蓝色。

质粒图谱：



DTT(蛋白级)现货价格关键词：DTT(蛋白级),DTT，Protein Grade,BTN131053


·柱式凝固血液DNA提取试剂盒
编号：BTN71204
英文名称：Coagulated blood DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是凝固血液DNA提取试剂盒(BTN71002)的升级产品，专门用于从新鲜或冻存的凝固全血(包括人和禽类)中提取基因组DNA。

产品特点：
1. DNA更加纯净，OD260/280在1.8-2.0之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等。
2. 操作更加简单快捷，比凝固血液DNA提取试剂盒快十分钟以上。
3. 每克新鲜凝固全血DNA产量为20-50μg DNA。
4. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取1mL到10mL或15mL塑料离心管中并将离心管放置于65℃待用。
2. 称取凝固血液0.1-0.5 g，加入到预热的溶液A中短暂匀浆。匀浆过程中将产生大量泡沫，属于正常现象。
 注意：如果是干的血块，用量不要超过0.2g，但需将干血块剪成微小的碎片。
3. 将匀浆液置于65℃水浴保温5分钟，然后将不超过0.75mL的匀浆液上清转移到新的1.5mL离心管中。
 注意：尽量不要转移凝固血液碎片。
4.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀后冰浴5分钟。
5. 12000～15000g室温离心3分钟，将上清液转移到新的1.5mL离心管中。
 注意：如果上清液呈红色，属于正常现象。
6. 加入0.2mL的自备*仿，震荡器上充分振荡30秒混匀。
7. 12000～15000g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物。将不超过0.6mL的上清液小心转移到新的1.5mL离心管中。
8. 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀后分两次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要12000～15000g离心半分钟并弃穿透液。
9.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液，12000～15000g离心半分钟。
10.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液，12000～15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤，一般可以省略)。
11. 12000～15000g离心半分钟以去除残留通用洗柱液。注意：此步不能省略，否则残留的通用洗柱液会影响DNA的后续反应。
12. 将离心吸附柱转移到一新的离心管中，加入100μL 通用洗脱液，12000～15000g离心半分钟，管底溶液即DNA溶液，可立即使用或放冰箱长期保存。

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