随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒说明书

保存条件 ：低温运输

保质期 ：长期

英文名 ：Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin)

库存 ：754

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒说明书的品牌：百奥莱博，是优质的探针标记及检测产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒等探针标记及检测产品请联系我司咨询订购。

名称：随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒说明书
编号：BTN90603B
规格：5次
英文名：Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin)
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。

产品特点：
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速，最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素，可以达到109cpm/μg DNA)，检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的，长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间，可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择，其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记，但需自备标记底物；BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记，不需自备标记底物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
2×A型标记反应液(自备标记物型)	50μl(仅A型有)
2×B型标记反应液(生物素型)	50μl(仅B型有)
2×C型标记反应液(DIG型)	50μl(仅C型有)
dATP,2mM	10μL(仅A型有)
dTTP,2mM	10μL(仅A型有)
dGTP,2mM	10μL(仅A型有)
dCTP,2mM	10μL(仅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×标记反应液(ABC三种之一)	10μl
超纯水	补水到15μl

注意：非同位素标记物由于疏水性强，容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合，所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好，因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交，竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟，或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性，立即放冰上待用。注意：如果PCR仪器不能设置到100℃，99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：

试剂盒类型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水

注：上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM，dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍，并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高，一般dTTP与标记dUTP的比例在65：35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP，则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例，如果使用32P标记的dUTP，则比活最好为3000Ci/mmol，浓度为好为10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关，具体见下表：

模版DNA用量	1小时后探针合成量	20小时后探针合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。
 注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针，因为这些标记分子疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针，由于其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。

想要了解更多关于随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒说明书的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：

·绿如蓝核酸染料(可见光型)
编号：BTN121002
英文名称：DNAgreen(Visible Light)
规格：10mL
本品是国内首款可见光核酸染料，用于电泳时替代EB，在可见光下观察DNA或RNA的电泳。

产品特点：
1. 无毒。对人体和环境没有任何毒害，有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2. 实时染色。可以在电泳过程中实时观察DNA和RNA的泳动，不需要任何额外的仪器设备或光源。注：本产品在紫外条件下不发光。
3. 由于避免了UV 对DNA的伤害，胶回收片段的克隆效率比UV下回收的片段高2-10倍，非常适用于PCR或酶切回收。
4. 稳定。对光、水和热的稳定性很好，可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
5. 灵敏。检测灵敏度跟EB相当，能满足常规核酸电泳实验要求。
6. 使用方法多样。既可以电泳中染色，也可以电泳后染色；既可用于琼脂糖胶，还可用于PAGE。
7.跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如超快核酸电泳液、TBE、TAE)兼容，但在超快核酸电泳液中背景最低。

储存条件：常温运输和保存(长期保存最好放4℃)，保存期限一年。

使用方法之一：电泳中染色(琼脂糖电泳时使用)
1.在 100mL 融化的琼脂糖凝胶加入100μl 本产品，充分混合均匀后倒胶，凝固后凝胶将呈淡紫色。本产品不能跟其他任何核酸染料同时使用(如EB和SYBR Green I)，否则会相互干扰，不会出现任何条带。使用时请严格按照此比例加入染料，否则将出现糊带现象。
2. 将凝固的琼脂糖凝胶放在 5分钟超快核酸电泳液、TEB或TAE中。为节约染料，不推荐将染料加到电泳缓冲液中。
3. 将DNA样品与6×A型DNAload 按5:1的比例混合后上样，由于本染料比EB 灵敏度稍低，所以DNA的上样量和DNA Marker的上样量最好比使用EB染料时多1倍。
 注意：不推荐使用常规的含*酚蓝和二甲*蓝的上样液，因为这些染料的颜色跟DNA和RNA的颜色都将呈蓝色，将严重干扰条带的观察和解读。本产品提供的6×A型DNAload 只含相当于50bp大小的红色染料，不会干扰蓝色DNA和RNA 条带的观察。
4.电泳，电泳参数同常规的电泳。跑在前面的是红色的电泳示踪染料(来于上样液)，其泳动速度相当于50bp的DNA。
5. 直接在光线明亮的位置直接观察电泳的进行，DNA和RNA 将呈现蓝色条带。如果有观察X光片用的灯箱，可以将电泳中的电泳槽或电泳后的凝胶平放在铺有塑料布的灯箱发光面的上面观察效果更佳。典型电泳结果如下：

6. 如果要回收DNA，则关闭电泳后直接切下所需条带，其余回收过程同常规方法。

使用方法之二：电泳后染色(PAGE胶染色必须使用电泳后染色法，琼脂糖电泳也可以选择本方法。不论是PAGE胶还是琼脂糖胶，本方法所需染料的用量比电泳中染色大2-10倍)
7. 按照常规方法进行 PAGE电泳或琼脂糖电泳。
8. 用电泳液将本产品稀释100-500倍(100mL 水需要加0.2-1mL 本产品)，将胶放入，室温下摇晃染色1-10分钟即可看见蓝紫色的DNA和RNA条带。具体染色多长时间取决于DNA和RNA的浓度。
9.染色液可以避光放4℃保存，能反复使用数次。

疑难解答：
Q：为何电泳的前沿出现下图这种只出现一条带的情况呢？

A: 这是由于样品中有大量RNA小片段污染(基因组DNA提取时没有RNase处理的话常常会有大量RNA污染)，这些小片段裹走了凝胶中的染料，使其后面的凝胶区域没有染料，因此后面的大片段没法染色。建议电泳后再染色观察大片段。
Q: 本产品可否用于RNA染色？
A：可以，也呈蓝紫色条带。
Q：本产品是否可以加入上样液中进行染色？
A：不行，本产品只能直接加入琼脂糖凝胶中进行染色或PAGE电泳后再染色。
Q：为何电泳时间长的话前端的DNA和RNA 条带很淡或根本看不见？
A：跟EB一样，电泳时本产品朝负极方向移动，当前端的DNA(最小片段)进入没有染料的区域时，已经跟DNA或RNA 结合的染料分子会逐渐脱落，所以条带会变淡或看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色。
Q：本产品在哪种缓冲液中效果最好？
A：本产品跟各种电泳缓冲液兼容，但背景最浅的是中超快核酸电泳液。


随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒说明书关键词：随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒,Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin),BTN90603B


·动物线粒体纯化试剂盒B(精提)
编号：BTN111207B
英文名称：Animal Mitochondria Purification Kit(B)
规格：5次
线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和生化研究都需要纯化线粒体。本产品可用于纯化动物细胞线粒体的试剂盒。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2．有粗提和精提两个选择，但是精提需要超速离心机。粗提所得线粒体可以直接用于蛋白分析(SDS-PAGE、Western Blot、ELISA等)、蛋白组分析和线粒体DNA纯化。精提线粒体可以用于偶联分析和体外线粒体蛋白合成等实验。
3．本产品一次可以处理约2×108个培养细胞，30mg培养细胞(相当于15瓶150mm培养细胞)可以纯化到到0.5-1.5mg线粒体。
4．本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不能用于动物实体组织。
5．提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

粗提型(BTN111207A)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml
蔗糖	80g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml

精提型(BTN111207B)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml×2
蔗糖	100g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一、准备工作(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)。未用完的下列溶液需要-20℃保存，否则容易长菌。下次使用前务必让沉淀溶解并摇晃均匀。
1．将溶液A和溶液B放冰上预冷待用。
2．配制1.7M高比重溶液(仅限BTN111207B精提型试剂盒，BTN111207A粗提型试剂盒不需要配制此溶液)：36克蔗糖用溶液B溶解并定溶到60mL，冰上预冷待用。
3．配制1.0M低比重溶液，BTN111207A粗提型试剂盒需要100mL，配制方法是将34克蔗糖用溶液B溶解并定溶到100mL，冰上预冷待用。111207B粗提型试剂盒需要150mL，配制方法是将51克蔗糖用溶液B溶解并定溶到150mL，冰上预冷待用。
4．配制线粒体重悬液，BTN111207A粗提型试剂盒需要200mL，配制方法是将150mL溶液B和50mL 1.0M低比重溶液混合；BTN111207B精提型试剂盒需要300mL，配制方法是将225mL溶液B和75mL 1.0M低比重溶液混合，即得300mL 线粒体重悬液，冰上预冷待用。

二、线粒体粗提(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)
5．如果提取材料是单层细胞，先用60mL自备的PBS缓冲液洗涤2×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在60mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集2×108个细胞，再用60mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在60mL PBS缓冲液中。
6．用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
7．加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的预冷的溶液A，轻柔重悬细胞。
8．冰上放置4-5分钟。注意：冰浴时间不要超过5分钟。
9．如果是成纤维细胞，由于其难以裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是成纤维细胞，则直接进入下步操作。
10．将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20%以下为佳。
11．加入1/3体积的、预冷的1.0 M低比重溶液，轻柔混匀。
12．用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
13．转移上清液到离心管中，冰上放置。在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴50μL左右上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液绿B染色液20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
14．用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 15000g离心15分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
15．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，4℃ 15000g离心15分钟，弃上清。
16．重复上步一次。
17．最后用适量的线粒体重悬液重悬线粒体，可用于各种后续实验(本试剂盒不提供相关试剂)，如果用于下面的精提操作，则用10mL线粒体重悬液重悬。

三、线粒体精提(需要超速离心机)
18．在跟超速离心机匹配的50mL的离心管中，加入10mL预冷的高比重溶液，再在上面加上10mL预冷的低比重溶液，最后再加上10mL线粒体粗提液。
19．70000g 4℃离心40分钟，线粒体将位于高比重溶液和低比重溶液之间区域。
20．小心用广口吸管吸出线粒体到新的离心管中，加入等体积的线粒体重悬液。
21．用平甩转子离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
22．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，在平甩转子离心机上4℃ 1000g离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
23．再重复上步一次。
24．最后用适量线粒体重悬液重悬线粒体，得到线粒体精提液。可以直接用于Lowry法蛋白浓度测定，也可以用于其他后续实验。


随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒说明书关键词：随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒,Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin),BTN90603B


·Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)
编号：BTN120654F
英文名称：Southern DNA Marker Oligo(Labeled by DIG)
规格：20次

·虾碱性磷酸酶(SAP)
编号：BTN120403
英文名称：Shrimp Alkaline Phosphatase
规格：300U
虾碱性磷酸酶与大肠杆菌来源的碱性磷酸酶同样，催化所有磷酸单酯的水解，不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解，也能催化ATP等焦磷酸键水解。但该酶与大肠杆菌来源的BAP以及小牛肠来源的CIAP 不同，通过65℃，15分钟的热处理，可使酶完全不可逆失活。

产品用途：
1．去除DNA片段的5´-末端的磷酸基。防止线状DNA的自身环化(Self-Ligation)。
2．除去PCR反应后残存的dNTP。PCR产物进行测序时，在反应体系中如果有多余的Primer和dNTP，将影响测序反应的正常进行。使用Exonuclease I分解残存的Primer；用SAP处理可降解多余的dNTP，之后不需要对PCR产物进行精制，立即可以进行测序反应。

产品组成：

成分	规格
虾碱性磷酸酶(1U/μL)	300U
10×Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：在37℃、pH9.8的条件下，1分钟内水解对硝基*(代"*")磷酸盐生成1μmol的对硝基*(代"*")酚所需要的酶量定义为1个活性单位。

纯度：

1．5U的本酶和1μg的λDNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2．5U的本酶和1μg的16S，23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化

使用举例：
1．在1.5mL离心管中配制下列反应液，定容至50μL。

成分	用量
DNA Fragment	1～10pmol
SAP(1～5μL)	1～5U
10×Buffer	5μL
dH2O	up to 50μL

2．37℃反应15～30分钟。
3．65℃反应15分钟(加热失活)。
4．加入2.5μL的3M NaCl(终浓度150mM)。
5．乙醇沉淀加入125μL(2.5倍量)的预冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟，离心。
6．加入200μl的70％冷乙醇清洗沉淀后，干燥。
7．TE Buffer(<20μL)溶解沉淀。

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