双分子荧光互补

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双分子荧光互补

▼服务简介

Hu等在2002年报道了一种直观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术——双分子荧光互补（Bimo-lecular fluorescence complementation，简称BiFC）。该技术巧妙地将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段（N-fragment、C-fragment），将这两个荧光蛋白的片段分别融合两个目标蛋白A、B，如果A与B蛋白发生了相互作用，在空间上互相靠近，就会重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，在激发光的激发下，荧光蛋白发出荧光。反之，若A与B蛋白之间没有相互作用，则不能被激发岀荧光。

▼应用场景

验证蛋白质之间是否存在相互作用，可与酵母双杂、Co-IP等实验结果相互验证；BiFC实验还能对细胞内蛋白相互作用的位置进行研究。

▼实验原理

在荧光蛋白（YFP、GFP、Luciferase等）的两个β片层之间的环结构上有许多特异性位点可以插入外源蛋白而不影响荧光蛋白的荧光活性。BiFC技术正是利用荧光蛋白家族的这一特性，将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段，再分别与目标蛋白融合表达。如果两个目标蛋白因物理相互作用而靠近，就使得荧光蛋白的两个分子片段在空间上相互靠近，重新形成有活性的荧光基团而发出荧光。在烟草植株活体细胞（植物基因）或293细胞（动物细胞）中检测蛋白质-蛋白质相互作用。