DNA甲基化测序

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服务名称 :DNA甲基化测序

提供商 :武汉爱基百客生物科技有限公司

全基因组DNA甲基化测序(WGBS)  

技术原理
全基因组DNA甲基化测序结合了硫酸氢盐转化(Bisulfite conversion)方法与新一代高通量测序技术,可在单碱基分辨率水平上高效的检测全基因组DNA甲基化的状态。
 
技术路线
 

技术优势
1.分辨率高:分辨率达到单碱基,是DNA甲基化检测的金标准;
2.效率高:彻底检测基因组所有C碱基,获取全面信息;
3.应用范围广:适用于所有具有参考基因组的物种,适于进行开创性工作。 

信息分析流程
1)数据过滤:对原始数据进行过滤,获得Clean Data;
2)PE reads拼接:使用软件FLASH将成对的reads拼接成Tag;
3)Tags聚类成OTU,并对OTU进行PCA、韦恩图、Rank曲线等分析;
4)通过数据库比对对OTU进行物种注释,绘制物种profiling柱状图、热图及系统进化树;
5)基于OTU聚类分析结果,对样品进行Alpha多样性分析;
6)基于OTU聚类分析及物种注释结果,对样品间复杂度比较,进行 Beta 多样性及聚类分析;
7)基于物种注释结果,找出组间导致样品差异的物种。
 
信息分析内容
 
样品要求
1)DNA样本
1.样品纯度:OD260/OD280=1.8~2.0,A260/A230≥1.6;无蛋白、多糖和RNA污染;
2.样品完整性:DNA无明显降解,需提供凝胶电泳检测胶图;
3.样品溶剂:建议样品用高质量试剂盒提取,溶于ddH2O,确保试剂内不含有影响酶活的酒精、苯酚等其他有机试剂。
2)血液样本
1.送样前处理:要求为全血样本,并加入抗凝剂(非肝素),无血凝块,冷冻后,干冰运输送样;
2.送样标准:全血≥3mL。
3)组织样本
1.送样前处理:活体取材后的组织需用0.9%生理盐水漂洗,以去除血渍和污物,并剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织类型,吸干,并将样品分割成50mg左右的小块(组织块越小,保存效果越好),放入1.5 mL或者2.0 mL的EP管中,液氮速冻后用封口膜封口,再将EP管放置于50mL离心管中或封口袋中,于-80℃超低温冰箱冻存;
2.送样标准:每个样本新鲜组织干重≥2g;若样本为非新鲜组织,DNA得率会降低,建议多送些样本。
 
项目周期
4个样品以下为40个工作日,4个样品以上根据实际情况确定时间。

武汉爱基百客生物科技有限公司
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