Pfu DNA聚合酶现货

保存条件 ：冷藏

保质期 ：长期

英文名 ：Pfu DNA Polymerase

库存 ：446

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

Pfu DNA聚合酶现货的品牌：百奥莱博，是优质的核酸扩增(PCR)产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多Pfu DNA聚合酶等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

名称：Pfu DNA聚合酶现货
规格：250U|250U×5
产地：国产|进口
英文名：Pfu DNA Polymerase
编号：JN0016
  本酶为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA pol基因在大肠杆菌中进行表达后经多步纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3´→5´外 切酶(校正)活性，当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围最广的高保真DNA聚合酶，其错误率仅为1.3x10-6，推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。

产品组成：

 

组份	JN0016-250U
Pfu DNA 聚合酶（5U/μl）	50μl
dNTP混合液(各10mM)	200μl
10×Pfu DNA Buffer with Mg2+	2ml

产品用途：用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入 突变、全基因合成，DNA片段的补平等（参见实验方案）。

使用建议：
Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3´端"A"突出，其PCR产 物的克隆有几种方案。
1、PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆 于平滑末端的载体中（参见实验方案）。
2、将产物3´末端加A后再与T载体连接（参见实验方案）。
3、引物中引入15bp与载体同源序列，利用BalbRec PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒（Cat# JN0001）直接连接到目的载体。
由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3´→5´外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系，并最后加入Pfu酶。

应用实例：


图例一）50μl扩增体系中，以5ngλDNA为模板，对500bp～6.0kb片段的扩增结果。
泳道1：0.5kb；泳道2：1.0kb； 泳道3：2.0kb；泳道4：3.0kb； 泳道5：4.0kb；泳道6：6.0kb 泳道M：1kb DNA Marker；

图例二） 50μl扩增体系中，分别以50ng～0.05ng人基因组DNA为模板，可对特定基因片段（380bp）进行很好的扩增。
泳道1：50ng；泳道2：5ng；泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；泳道M：DNA 2000 Ladder

常用反应体系（50μl）

10×Pfu Buffer	5μl
上游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
dNTP(各10mM)	1.0μl
模板	1-50ng（质粒）
	10ng-1μg(基因组)
Pfu	0.25μl（1.25U）
ddH2O	至50μl
*Mg2+终浓度为1.5mM

常用PCR循环：

当扩增片段<3K：

温度	时间	循环数
94℃	1分钟30秒
94℃	30秒	30次循环
57℃	30秒
72℃	根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：

温度	时间	循环数
94℃	20秒
94℃	5秒	30次循环
68℃	根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR 方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

活性定义：在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。


更多有关Pfu DNA聚合酶现货的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·一步法RT-qPCR试剂盒(SYBR Green)
编号：JN0051
英文名称：One-Step qRT-PCR UltraMix(SYBR Green)
规格：100次
  本制品是采用SYBR Green嵌合荧光法进行qRT-PCR 的专用试剂。制品中已经将反转录酶、DNA聚合酶、反应用Buffer、dNTPs、SYBR Green等试剂预混在一起，是一种2×浓度的预混型试剂，反应液的配制十分方便简单。
  本制品采用HotStart Taq并结合特别配置的缓冲体系，能有效抑制非特异性反应，从而在更广的范围内进行准确定量。
  本制品能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，cDNA的合成与PCR反应在一个管中进行，反转录结束后可直接进入PCR循环而不需额外步骤。本制品配有不同浓度的ROX Reference Dye，用于不同仪器校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。

产品组成：

组份	体积
2×BalbScript SYBR One-Step qRT-PCR UltraMix	1ml
BalbScript RT Enzyme Mix	100μl
RNase Free Water	1ml×2支
ROX Reference Dye I	200μl
ROX Reference Dye II	200μl

产品特点：
高特异性：采用特殊工艺制造的热启动HotStart Taq DNA聚合酶，大大提高了PCR扩增的特异性。
高效：百奥莱博精心配制的RealTime PCR专用2×UltraMix，具有更高扩增效率和灵敏度。

使用建议：
1、原则上-20℃避光保存。如果持续使用，可在4℃内进行短期保存，但此时须遮光，建议使用遮光箱或用添附的铝袋进行保存。
2、请将体系上下颠倒混匀，动作轻柔，避免起泡，并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头及Microtube等，尽量避免污染。
3、一般为了增加敏感度及扩增效率且抑制非特异性反应，扩增的目标序列越短越好，建议设计在200bp以下。另外，GC cluster(特别是3´末端)等会引起引物二聚体等非特异反应，一般不建议采用，特别是Intercalater Assay受非特异性反应影响较大，更需注意。

常用反应体系（20μl）

成分	体积
2×BalbScriptSYBR One-Step qRT-PCR UltraMix	10μl
BalbScriptRT Enzyme Mix	1μl
上游引物	0.2-1.0μM（终浓度）
下游引物	0.2-1.0μM（终浓度）
模板	1-2μl
RNase Free Water	至20μl

常用PCR循环：

两步法扩增程序（推荐）：
42℃	30min
94℃	5min
35-40次循环	95℃，15s 60℃，1min
三步法PCR扩增程序(引物Tm值较低或其他原因)：
42℃	30min
94℃	5min
35-40次循环	95℃，15s 57℃，20s 72℃，30s

储存条件：-20℃


Pfu DNA聚合酶现货关键词：JN0016,Pfu DNA聚合酶,Pfu DNA Polymerase

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