端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)价格价格

保存条件：低温运输

保质期：长期

英文名：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit

库存：734

供应商：北京百奥莱博科技有限公司

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)价格，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)价格
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit
本品是我司在经典TRAP技术基础上改良而得，专门用于快速测定人类细胞端粒酶的相对活性(需要跟对照样品比较)。端粒酶存在于85-90%的肿瘤组织中，因此通过检测端粒酶活性就能早期诊断大多数肿瘤。目前最常用的检测端粒酶活性的方法就是TRAP，它利用端粒酶能在外加的TS模板DNA的末端添加不同数量的TTAGGG序列这一特点，通过PCR检测延伸产物而高效检测端粒酶活性。原理如下：
TRAP原理图

产品特点：
1．一站式，提供从细胞裂解到PCR的所有试剂，但不含PAGE和银染试剂。
2．一管式操作，端粒酶延伸和PCR在同一体系中完成，方便快捷。
3．提供改良的、长为150bp的内参和含8个端粒序列的合成端粒，可有效排除PCR假阴性。内参长度远大于TRAP产物，不会干扰结果分析。
4．改良的TS模板和PCR引物，极大降低了引物二聚体的形成。
5．既可用于培养细胞，也可用于实体组织。
6．灵敏度高，最低可以检测到10个肿瘤细胞中的端粒酶活性。

试剂盒组成：

成分	规格
TRAP细胞裂解液	10mL
PCR Mix 3.0	1.5mL
合成端粒(PC)	50μL
TS-引物混合物(含内参)	300μL
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、端粒酶的提取
注意：端粒酶是蛋白质和RNA组成的复合体，RNA极容易被降解，因此，提取端粒酶应该跟提取RNA一样，尽量在低温条件下快速操作，并且必须使用RNase-free的耗材，桌面最好用固相RNase清除剂清洁(BTN3090)清洁。
1．对冷冻的实体组织：将50-100mg冷冻组织在液氮中用预冷的研磨器研磨成粉末，再转移到预冷的玻璃匀浆器中，加入200μl预冷的TRAP细胞裂解液，温和手动匀浆数次后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次，然后直接进入第3步操作。为保证裂解效果，可在显微镜下观察。如果组织样品不足50-100mg，可以按比例降低TRAP细胞裂解液的用量。
2．对新鲜的培养细胞和组织：用自备的预冷PBS洗涤105-106个经过胰酶处理的细胞或50-100mg新鲜组织，3000g 4℃离心5分钟，弃上清；加入200μL预冷的TRAP细胞裂解液悬浮细胞或组织。对细胞：涡旋振荡10秒后置冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。对组织：在冰上用玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。如果细胞不足1×106或50-100mg，可按比例降低TRAP裂解液的用量。
3．12000-14000g 4℃离心20分钟。
4．收集160μL上清，先取部分用于测定蛋白质浓度，可通过测定215nm和225nm的光吸收得到，计算公式是蛋白质浓度(μg/μL)=0.144×(A215-A225)×稀释倍数，也可使用BCA法测定蛋白浓度。本试剂盒制备的细胞裂解物的蛋白浓度一般在10-750 ng/μL。知道各样品的蛋白浓度后，可用TRAP细胞裂解液将各样品的蛋白浓度调成一样便于比较，然后按10μL/管分装得到至少15管裂解物，放-80℃冷冻保存(可存放一年)。每个样品可取一管进行热灭活(95℃处理10分钟)后再放-80℃冷冻保存，此管将作为该样品的阴性对照。

二、TRAP反应
5．确定每个TRAP反应的细胞裂解物用量：为便于分析比较，每个TRAP反应所用的蛋白量(或细胞数)必须一样。由于细胞裂解物中一般都有高浓度的不明Taq DNA聚合酶抑制物(TRAP失败最常见的原因)，因此最佳结果往往是用稀释10-1000倍后的细胞裂解物得到。建议用一个样品稀释不同浓度做TRAP预实验。
6．在PCR管中按下表设置TRAP反应(50μL反应体系，以A和B两个样品为例)：

成份	A样品管	A阴性对照管	B样品管	B阴性对照管	实验阴性对照	实验阳性对照
A样品	2μl	-	-	-	-	-
A阴性对照	-	2μl	-	-	-	-
B样品	-	-	2μl	-	-	-
B阴性对照	-	-	-	2μl	-	-
TRAP细胞裂解液	-	-	-	-	2μl	-
合成端粒	-	-	-	-	-	2μl
TS引物混合物	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl
PCR Mix	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl
超纯水	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl

注：为避免污染，最好等其他样品加完并盖上盖后再加合成端粒。
7．吹打混匀后进行PCR扩增，扩增条件(仅供参考，用户可优化)如下：

步骤	温度	时间
端粒酶延伸	30℃	30min
端粒酶灭活	95℃	5min
PCR(循环35次)	94℃	30s
	55℃	60s
	72℃	30s

三、PAGE-银染检测及结果解读(本试剂盒不含PAGE-银染检测试剂盒)
8．取5μL PCR反应液进行10%非变性PAGE电泳-银染显色实验(需另购本公司PAGE电泳套装和银染试剂盒)。如果背景高(主要是由反应体系中的蛋白成分引起)，可以先进行PCR产物纯化再进行PAGE电泳和银染。
9．跟预期结果(见下表)比较。如果结果跟下表不一致，则需要按具体情况分析原因。

现象	样品管结果	样品阴性对照结果	实验阴性对照结果	实验阳性对照结果
典型TRAP条带 (条带数不限)	有则有端粒酶活性无则无端粒酶活性	不出现	不出现	不出现
阳性对照的TRAP 条带(仅8条带)	不出现	不出现	不出现	出现
150bp内参	可出现可不出现	出现	出现	出现

注：本试剂盒所用引物产生的典型TRAP条带最小条带为59bp。

疑难解答：
1．如果样品管有内参带，但没有TRAP条带，可能是端粒酶活性低或者失活。制备细胞裂解物时可在TRAP细胞裂解液中加入1/100体积的RNase抑制剂以抑制RNase活性，并在端粒延伸反应后增加DNA纯化一步，纯化后的DNA再用于PCR。此两步法TRAP需要用户自备DNA纯化试剂和dNTP。
2．如果样品对照管(端粒酶已经灭活)出现TRAP条带，可能是TRAP产物污染，需要使用洁净的PCR管和PCR试管架。样品制备、PCR设置和电泳需在不同房间进行。也可能是端粒酶没有彻底灭活，建议用RNase酶解法或酶解+热灭活法。
3．实验阴性对照管的实验结果中出现TRAP条带，可能是引物二聚体，可采取两步法TRAP，并且将DNA模板加入到70℃预热的PCR Mix3.0中再进行PCR。
4．实验结果不好时，可以直接采取2步法，先做端粒酶延伸和灭活，然后再纯化DNA，用纯化的DNA做PCR。此法需要用户自备dNTP。

关于端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)价格的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法)
编号：BTN80926
英文名称：Fungus DNA Column large-scale extraction kit(Glass bead method)
规格：4次
本试剂盒在柱式真菌DNA提取试剂盒(BTN70901)基础上改良而得大提升级产品，主要用于大量快速从各种真菌材料中提取基因组DNA。

产品特点：
1.处理量大，一次可以处理1-3g 各种真菌组织。
2. 纯度高，OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制剂，得到的DNA可以不经稀释直接用于酶切、PCR、real-timePCR、multiplex PCR、RAPD、RELP、AFLP、Southern Blotting，microsatellite analysis等各种后续分子生物学实验。
3. 采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌DNA。
4.产率一般在10-100μg/g真菌样品。离心吸附柱最大吸附量为800μg。
5. DNA片段长度一般在20-40kb左右。
6.适用范围广，适用于度大多数真菌材料，包括酵母(S.cerevisiae、S.pomb、Pichia pastoris)等。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	40ml
溶液B	40ml
溶液C	100ml
大提离心吸附柱	4套
通用洗柱液	200ml
DNA洗脱液2.0	5ml
酸洗玻璃珠，400μm	40g
说明书	1份

储存条件：常温运输,4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对菌液：取60-100mL 过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落(约1 g)，转移到装有20mL 无菌水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料，一般取1-3g左右，直接加入到离心管中，在材料中加入无菌水20mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
4.沉淀中加入10mL溶液A和10 克的玻璃珠，涡旋震荡10分钟，可以延长震荡时间。
5. 加入10mL的溶液B，涡旋震荡5分钟，12000rpm离心2分钟，将上清液全部转移到一个50mL的干净的塑料离心管中。
6.在上清中加入3倍体积的溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
7. 将20mL 通用洗柱液加入离心柱，12000rpm离心1分钟，弃穿透液。
8. 重复上步操作一次。
9. 12000rpm 空甩1分钟去除残留液体。
10. 将离心柱放置在一新的50mL塑料离心管中，加入500μL DNA 洗脱液2.0。
11.室温放置5分钟后12000rpm离心1分钟，管底即为真菌DNA样品，吸取离心管中的DNA溶液重新滴加在吸附柱上，离心洗脱以收集更多的DNA。
12. 所得DNA可立即使用，也可长期保存在－20℃。
13. 注：如离心机转速不能达到12000rpm，可以用最大转速离心10-15min 代替12000rpm离心1-2min。

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·湿法电转液(干粉)
编号：BTN100928
英文名称：Wet Transfer Buffer Powder
规格：20L
本产品配制的溶液适用于湿转时，湿润、浸泡电转膜及垫子和用作电转工作缓冲液。用前直接加入蒸馏水与甲醇混匀即可。不含有机溶剂，便于储存和运输，且操作简便，一般适合分子量在100KD以上的蛋白。本产品可以回收重复使用2-3次，节约研发成本，如果转膜液颜色变成浅棕色或黄褐色，应该丢弃。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·Maximov固定液
编号：BTN131288
英文名称：Maximov Fixative Solution
规格：250mL
本固定液主要成分为*化汞、重铬酸*、甲醛。与Zenker固定液相比，本产品不含铬酸，所以重铬酸*未被酸化，因此，对细胞浆固定较好。甲醛有促染胞浆的作用，增加对酸性染料的亲和力。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·亮抑蛋白酶胎溶液(10mg/mL)
编号：BTN100836
英文名称：Leupeptin Solution
规格：1mL
本产品是浓度为10mg/mL水溶液。工作浓度为0.5mg/mL。其作用是抑制丝*酸和巯基蛋白酶，如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、组织蛋白酶B、血纤维蛋白溶酶、激肽释放酶等。亮抑蛋白酶肽是由玫瑰链霉菌Streptomyces roseus MB-26-AI产生的胰蛋白酶抑制剂，它是许多蛋白酶抑制剂中的一种，它的抑制作用与底物呈竞争性抑制。对血纤维蛋白溶酶的抑制IC50(半抑制浓度)为8μg/mL，但不抑制糜蛋白酶。

储存条件：低温运输，4℃保存一周，-20℃保存6个月。

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