dNTP溶液(2.5mM)说明书价格_品牌:百奥莱博-丁香通官网

保存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

保质期：长期

英文名：dNTP Solution，2.5mM

库存：501

供应商：北京百奥莱博科技有限公司

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

dNTP溶液(2.5mM)说明书由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多dNTP溶液(2.5mM)等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

名称：dNTP溶液(2.5mM)说明书
编号：BTN51208A
英文名：dNTP Solution，2.5mM
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
本产品是dATP、dTTP、dGTP、dCTP四种核苷酸的混合液，每种核苷酸的浓度为2.5mM，纯度在98%以上(HPLC检测)，不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA测序、DNA探针标记等反应。使用浓度根据具体的反应决定，请参考相关手册。

dNTP的分子结构

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

DNA为何使用2"-脱氧核糖和胸腺嘧啶？
DNA为何不选择现成的光合作用产物核糖和合成RNA的原料尿嘧啶(uracil)分别作为其糖分子和碱基，而去选择需要额外的合成步骤才能得到的2"-脱氧核糖和胸腺嘧啶(thymine)，其原因何在呢？目前的主流观点是：DNA不能选择核糖的原因之一是由于核糖2"位置上的OH基团会使得到的双螺旋骨架结构不均匀、不平行，难以有效地折叠进染色体结构中，而使用2"-脱氧核糖则能得到均匀平行的双螺旋结构；原因之二是核糖2"位置上的OH基团会对邻近的磷酸二酯键进行分子内亲核攻击，降低分子的稳定性，而对遗传物质来说稳定性十分重要，所以DNA选择了失去分子内亲核攻击能力的2"-脱氧核糖。对信使分子而言，稳定性并不重要，所以RNA仍然使用核糖。
DNA使用胸腺嘧啶的原因是DNA中的胞嘧啶(cytosine)会缓慢水解变成尿嘧啶，如果尿嘧啶也是DNA的正常组成成份，则DNA修复系统就不能区分哪些尿嘧啶是正常的，哪些是需要修复的。使用胸腺嘧啶(比尿嘧啶分子多一个甲基)不但能保持跟尿嘧啶一样的形成碱基对的能力，同时又能跟尿嘧啶区别开来，使DNA分子中出现的任何尿嘧啶都能被尿嘧啶DNA糖苷酶(uracil-DNA glycosylase)发现和修复。

关于dNTP溶液(2.5mM)说明书的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·柱式BAC载体DNA提取试剂盒
编号：BTN90607
英文名称：BAC carrier DNA column extraction kit
规格：50次
BAC是专门用于克隆长片段插入片段的载体，可以插入的片段一般在30-300 Kb，平均长度为130 Kb。但用常规的质粒DNA提取方法提取15 Kb以上的质粒DNA效果都不尽人意，为此本公司对常规的方法进行了诸多改良。

试剂盒特点：
1. 使用于不超过 100 kb的大型质粒DNA，包括BAC、PAC、P1和Cosmid等。如果超过100 kb，建议使用沉淀法或离子交换法。
2. 每 mL细菌培养液可纯化到50-150 ng左右的BAC和其他大型质粒DNA。
3. 安全，无酚*仿等危险的有机物抽提。
4. 柱式操作，比经典的沉淀法操作简单，重复性好，每次都能获得理想效果。
5. 得到的DNA 纯净，可以直接用于PCR、酶切和测序，不需要再纯化。
6.超值，性价比高。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	13ml
溶液B	13ml
溶液C	18ml
RNase A溶液(10mg/mL)	0.75ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(RNase A溶液需要4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 接种单个菌落到 2-5mL LB培养基中，37℃摇晃过夜培养。注意：不要使用Terrific Broth或2×YT培养基等高营养培养基，因为这样得到的菌液细菌密度太高，纯化BAC时，蛋白质和RNA污染较多，反而会影响BAC的产率。
2. 12000～15000×g 4℃离心5分钟，弃上清(培养基)，再短暂离心，吸弃残留液体(培养基)，得到细菌沉淀。
3. 用 250μL溶液A(第一次用前需先将全部RNase A溶液加入到13mL溶液A中，摇匀后再取用。未用完的溶液A最好在4℃保存)重悬细胞沉淀，必要时用枪头充分吹打使菌体重悬已保证没有成团的细菌块。
4. 冰上放置5分钟。
5. 加入250μL溶液B(如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可。此步处理不能超过5分钟，否则DNA的碱损伤比较严重。千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA 断裂产生的片段非常容易污染BAC DNA。
6. 冰上放置4分钟。注意：一定要严格控制时间，时间超过4分钟，BAC产率将大大降低。
7. 加入350μL溶液C，轻柔颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生。
8. 冰上放置5分钟。
9.室温 12000～15000g离心10分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。
10. 静置 2分钟以让BAC DNA与吸附柱充分结合，此步十分重要。
11.室温 12000～15000g离心1分钟，弃收集管中的废液。
12. 加入500μL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中废液。注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
13. 重复上步1次。
14.室温 12000～15000g离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中，加入30-50μL 65-80℃预热的DNA 洗脱液，室温放置2分钟。常温的DNA 洗脱液也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
16.室温 12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即BAC DNA。
17. 由于百奥莱博的吸附柱结合DNA 能力较强，如果再加适量DNA洗脱液到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多BAC DNA(相当于第一次洗脱的20-30%)，但注意不要使用上步得到的DNA 洗脱液来洗脱。
18. 得到的BAC DNA即可用于后续的检测或实验。

其他处理：
1. 如果要制备无内毒素BAC DNA，则需要用液相内毒素清除剂(需要另购)处理BAC DNA溶液。或者在提取BAC DNA之前，用菌体内毒素清除剂(需要另购)处理细菌。
2. 如果有基因组 DNA污染，可以用线状DNA 清除剂(需要另购)将其酶解。
3. 如果有 RNA污染，可以加入RNase酶解，然后用酚*仿抽提，再用乙醇沉淀。
4. 如果有蛋白质污染，可以用酚*仿抽提，再用乙醇沉淀。

dNTP溶液(2.5mM)说明书关键词：dNTP Solution，2.5mM,dNTP溶液(2.5mM),BTN51208A

·动物线粒体纯化试剂盒B(精提)
编号：BTN111207B
英文名称：Animal Mitochondria Purification Kit(B)
规格：5次
线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和生化研究都需要纯化线粒体。本产品可用于纯化动物细胞线粒体的试剂盒。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2．有粗提和精提两个选择，但是精提需要超速离心机。粗提所得线粒体可以直接用于蛋白分析(SDS-PAGE、Western Blot、ELISA等)、蛋白组分析和线粒体DNA纯化。精提线粒体可以用于偶联分析和体外线粒体蛋白合成等实验。
3．本产品一次可以处理约2×108个培养细胞，30mg培养细胞(相当于15瓶150mm培养细胞)可以纯化到到0.5-1.5mg线粒体。
4．本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不能用于动物实体组织。
5．提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

粗提型(BTN111207A)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml
蔗糖	80g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml

精提型(BTN111207B)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml×2
蔗糖	100g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一、准备工作(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)。未用完的下列溶液需要-20℃保存，否则容易长菌。下次使用前务必让沉淀溶解并摇晃均匀。
1．将溶液A和溶液B放冰上预冷待用。
2．配制1.7M高比重溶液(仅限BTN111207B精提型试剂盒，BTN111207A粗提型试剂盒不需要配制此溶液)：36克蔗糖用溶液B溶解并定溶到60mL，冰上预冷待用。
3．配制1.0M低比重溶液，BTN111207A粗提型试剂盒需要100mL，配制方法是将34克蔗糖用溶液B溶解并定溶到100mL，冰上预冷待用。111207B粗提型试剂盒需要150mL，配制方法是将51克蔗糖用溶液B溶解并定溶到150mL，冰上预冷待用。
4．配制线粒体重悬液，BTN111207A粗提型试剂盒需要200mL，配制方法是将150mL溶液B和50mL 1.0M低比重溶液混合；BTN111207B精提型试剂盒需要300mL，配制方法是将225mL溶液B和75mL 1.0M低比重溶液混合，即得300mL 线粒体重悬液，冰上预冷待用。

二、线粒体粗提(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)
5．如果提取材料是单层细胞，先用60mL自备的PBS缓冲液洗涤2×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在60mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集2×108个细胞，再用60mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在60mL PBS缓冲液中。
6．用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
7．加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的预冷的溶液A，轻柔重悬细胞。
8．冰上放置4-5分钟。注意：冰浴时间不要超过5分钟。
9．如果是成纤维细胞，由于其难以裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是成纤维细胞，则直接进入下步操作。
10．将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20%以下为佳。
11．加入1/3体积的、预冷的1.0 M低比重溶液，轻柔混匀。
12．用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
13．转移上清液到离心管中，冰上放置。在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴50μL左右上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液绿B染色液20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
14．用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 15000g离心15分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
15．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，4℃ 15000g离心15分钟，弃上清。
16．重复上步一次。
17．最后用适量的线粒体重悬液重悬线粒体，可用于各种后续实验(本试剂盒不提供相关试剂)，如果用于下面的精提操作，则用10mL线粒体重悬液重悬。

三、线粒体精提(需要超速离心机)
18．在跟超速离心机匹配的50mL的离心管中，加入10mL预冷的高比重溶液，再在上面加上10mL预冷的低比重溶液，最后再加上10mL线粒体粗提液。
19．70000g 4℃离心40分钟，线粒体将位于高比重溶液和低比重溶液之间区域。
20．小心用广口吸管吸出线粒体到新的离心管中，加入等体积的线粒体重悬液。
21．用平甩转子离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
22．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，在平甩转子离心机上4℃ 1000g离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
23．再重复上步一次。
24．最后用适量线粒体重悬液重悬线粒体，得到线粒体精提液。可以直接用于Lowry法蛋白浓度测定，也可以用于其他后续实验。

dNTP溶液(2.5mM)说明书关键词：dNTP Solution，2.5mM,dNTP溶液(2.5mM),BTN51208A

·phi29 DNA聚合酶
编号：BTN100937
英文名称：φ29 DNA Polymerase
规格：250U
从Bacillus subtilis 噬菌体phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶phi29 DNA Polymerase是一种高持续扩增能力的聚合酶(最长达70 kb)，具有很强的链置换和连续合成特性，并具有3´→5´核酸外切酶(校正)活性。本产品的浓度为10U/μL。

产品特点：
1．在所有已知的聚合酶中，具有最高的合成持续性和链置换活性。最长可合成70 kb长度的DNA片段。
2．中温条件下高保真复制。
3．扩增产物可直接用于下游应用，如 PCR、限制酶切、SNP基因分型等。

产品组成：

成分	规格
phi29 DNA聚合酶(10U/μL)	25μl
10×phi29 DNA聚合酶 Buffer	250μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

失活条件：65℃下10分钟热失活。

存储条件：100mM KCl，50mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.5% NP40，0.5% Tween 20和50%甘油，贮存于-20℃。

10×phi29 DNA聚合酶Buffer的组成：330mM Tris-acetate(pH7.9 @ 37℃)，100mM Mg-acetate，660mM K-acetate,10mM DTT，1%(v/v)Triton X-100。

活性定义：1U指30℃条件下，10分钟内使0.5pmoL的dCTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。