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库存 :大量
供应商 :上海钰博生物科技有限公司
检测限 :62.5-4000pg/mL
检测方法 :用于科研实验检测,定量定性检测
应用 :科研使用
适应物种 :Rattus norvegicus Rat
标记物 :血清,血浆,尿液及相关液体等
样本 :人,大鼠,小鼠,兔,猪,植物等
规格 : 48T/96T
[中方名称]:DKK3试剂盒[英文名称]:Rat Dickkopf Related Protein 3 (DKK3) ELISA Kit
[检测原理]:采用双抗体夹心
[检测范围]:62.5-4000pg/mL
[最低检测限]:22.5pg/mL
[保存温度]:短期4℃/长期-20℃保存
[应用范围]:科研用检测试剂
[产品规格]:96T /48T
[待检样本]:体液,血清,血浆,细胞培养上清液,尿液,组织匀浆,心房水标本等等。
(一)间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;
6.’*后一遍用DDW洗涤。
DKK3试剂盒其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
(二)双抗体夹心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
DKK3试剂盒洗板方法:
一、手工洗板方法:吸去(不行触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,在实验台上烘托几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几回,将举荐的洗刷缓冲液至少0.4ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此进程数次。
二、自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练运用后再用到正式实验进程中。
三、特异性:本试剂盒可一同检测各方针,且与其它相关蛋白无穿插反应。
常有刚刚接触ELISA实验的新手说操作复杂,步骤化很多,不易实验。其实当我们掌握了其中的技巧与注意避免之后就会简单很多。我公司高手分析出操作要点提示,这些个实验技DKK3试剂盒巧得记牢:
1. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
2. 所有液体组分使用前充分摇匀。
3. 实验前,产品应保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
实验记录
1.所有实验的原始资料均应存档;
2.所有的记录均应规范登记在册;
3.原始登记表应记录试剂来源、批号;
4.质控血清的来源及测定值并注明是否在控;
5.签上实验者姓名及审核者姓名。
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