超快DNA-RNA两用转膜试剂盒现货供应

保存条件 ：常温运输及保存

保质期 ：一年

英文名 ：Rapid Nucleic Acid Blotting Kit

库存 ：748

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应超快DNA-RNA两用转膜试剂盒现货供应，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：超快DNA-RNA两用转膜试剂盒现货供应
品牌：百奥莱博
编号：BTN121110
规格：5次
本试剂盒是基于毛细管转膜法的Southern和Northern印迹膜制备试剂，专门用于从电泳得到的凝胶中制备用于Southern杂交和Northern杂交的印迹膜。其操作流程如下：


产品特点：
1.即开即用，提供制备5张13×20cm大小的Southern杂交和Northern杂交印迹膜所需要的印迹膜和溶液，不需要用户单独准备。
2.快速：转膜过程只需要1小时，整个过程只需要2.5小时(对DNA)或1.5小时(对RNA)。
3.跟硝酸纤维素膜、带电尼龙膜、中性尼龙膜和PVDF膜兼容。包括Nytron、Gene Screen Plus、Zetabind、Biotrans、Hybond-N、Immobilon等。
4.A型提供硝酸纤维素膜，适用于400bp以上的靶分子，背景低。B型提供带电尼龙膜，适用于40bp以上的靶分子，结合力强。如需中性尼龙膜或PVDF膜，需另购。
5.使用优化的下向转膜法，不但效率比上行转膜法高30%左右，而且条带弥散度低、分辨率高。
可用琼脂糖胶(包括脉冲电泳胶，DNA电泳、RNA甲醛胶电泳和RNA戊二醛电泳)和DNA PAGE胶。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	660g
溶液B	100ml
溶液C	250ml
硝酸纤维素膜13×20cm	5张(仅A型提供)
带电尼龙膜13×20cm	5张(仅B型提供)
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：

一：Southern印迹膜的制备
1.按常规方法进行电泳(包括脉冲电泳)，本试剂盒不提供电泳所需试剂。如果进行常规的Southern杂交，建议使用0.7%琼脂糖进行电泳，分离酶切的基因组DNA。电泳时最好加电泳分子量对照、酶切对照(先将标记的全长lambda DNA或探针质粒与样品DNA的混合，再酶切)、阴性样品(不含检测片段的DNA样品)、杂交分子量对照(标记的1.lambda/Hind III)等。电泳后和荧光标尺并排拍照。
2.变性：首次使用时需配制变性液2.5L(在3L的干净玻璃烧杯中加入约2L自备的去离子水，搅拌缓慢中加入220g成分A和100mL溶液B，溶解后定容到2.5L后即可用)，将凝胶转移到一个至少10倍于胶体积的变性液中，脱色摇床上室温下摇晃处理60分钟(如果使用带正电尼龙膜，此步处理可以缩短到30分钟)。未用完的变性液可放瓶中室温保存。
3.转膜：如果使用带正点的尼龙膜，则直接用上步配制的变性液转膜，如果使用中性尼龙膜和硝酸纤维素膜，则需配置转膜液(在3L的干净玻璃烧杯中加入约2L自备的去离子水，缓慢搅拌中加入440 g成分A和2mL溶液B，溶解后定容到2.5L后即可用)。将凝胶转移到至少10倍于凝胶体积的转膜液中，脱色摇床上室温下摇晃处理15分钟。
4.测量凝胶的大小，然后借助尺子准确切出一张印迹膜，每边比凝胶大1mm，并切去一角，将印迹膜漂浮于去离子水上20分钟确保全部湿润，再按下图设置下行转膜体系(比上行转膜体系效率高30%)。图中membrane即印迹膜，transfer buffer即转膜液，吸水滤纸厚度为2-3cm，一般按每cm2印迹膜需要1mL转膜液的比例准备转膜液。对大的凝胶，可以同时使用两张滤纸分别跟两个容器的转膜液连接以便使转膜匀浆。

5.转膜1小时。结束后用铅笔标记核酸结合面以免搞错。注意：不要过夜转膜，否则信号将降低50%。
6.将印迹膜在中和液中处理10分钟，中和液的用量至少为0.5mL/cm2印迹膜。
7.可将凝胶放入EB(0.5μg/mL)溶液中染色30分钟后UV下观察残留核酸的量，反推转膜效率。此步也可跳过。
8.将印迹膜夹在两层滤纸中间80℃干燥15分钟以固定核酸(不需真空)，干燥时间不需延长，否则杂交信号可能会降低。
9.此时印迹膜可直接用于后续的核酸杂交实验或者在干燥状态下保存待用(可放数月)。

二：Northern印迹膜的制备
10.按常规方法进行电泳，本试剂盒不提供电泳所需试剂。本方法适用于甲醛变性胶和乙二醛变性胶，电泳后和荧光标尺并排拍照。
凝胶不需要变性和中和处理(也不能变性，否则RNA将会降解)，直接进入转膜步骤(同Southern印迹膜制备的第3到第9步)。

更多有关超快DNA-RNA两用转膜试剂盒现货供应的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
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·预染蛋白Marker(11～180kD)
编号：BTN151201
英文名称：Prestained Protein Marker(11-180kD)
规格：200μL
本产品包含10种彩色预染的已知分子量标准蛋白(预染marker)，分子量范围为11-180kDa，每种蛋白含量约为0.2～0.4mg/mL。预染marker可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经SDS-PAGE凝胶电泳或转移到PVDF或NC 膜上可得到清晰的10 条彩色蛋白条带，其中25kDa为绿色条带，75 kDa 为红色条带，其余8 条是蓝色条带。


产品特点：
1．三色预染，颜色鲜亮，条带整齐，便于观察。
2．稳定性能突出，经检测 4℃放置两年无明显降解。
3．用量少，节约成本，仅5μL即可完美呈现(1.5mm，10孔梳)。
4．广谱多带，一支即可满足多种实验需求。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

注意事项：
1．本产品含有较高浓度甘油，常规-20℃保存为液体状态，可直接使用。若冰箱温度不稳，导致结冰，可适当分装后置于4℃保存，至少稳定6个月。
2．本产品分离效果与PAGE胶浓度相关，若分离胶浓度低于15%，25kDa以下条带不易分离，但不影响绿色(25kDa)及以上条带。如果目的条带小于25kDa，建议分离胶浓度大于或等于15%。
3．转膜效果与转膜时间有关，需根据客户目的条带大小而定，如果转膜后较大分子量条带有部分未转膜成功，属于正常现象。

使用方法：
1．本产品是即用型液体，可直接上样电泳。上样前无需加热、稀释或添加还原剂。
2．上样5μL，SDS-PAGE电泳过程及转膜后可看见清晰的彩虹条带。
3．建议分离胶浓度为15%。


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·白细胞裂解液
编号：BTN130989
英文名称：White Cell Lysis Solution
规格：250mL
本品为即用型白细胞裂解溶液，可以用于裂解分离纯化好的血液白细胞，用于DNA提取、RNA提取等后续实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以DNA提取为例)
1. 取新鲜抗凝血5mL，在10mL或15mL的塑料离心管中用红细胞裂解液裂解红细胞(红细胞裂解液有几种配方，用户需要根据所选产品的使用手册进行操作，这里不列出每种的详细步骤)，也可以直接2500rpm离心5分钟后取白细胞层到一新的10mL或15mL的塑料离心管中。
2.在所得的白细胞沉淀中或所得白细胞层溶液中加自备的生理盐水使得白细胞的终体积为2mL。
3. 加1mL的本产品，混匀后55℃ 保温3小时，其间轻轻振摇数次。
4. 加入3mL自备的Tris饱和酚，轻轻震摇5分钟，使得水相和酚相充分分开。
5. 3500rpm离心15分钟，上层水相含DNA，中间白色层为蛋白质，下层为酚相。
6. 将非常粘稠的含DNA的上清液转移到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。
7. 再用Tris饱和酚重复上面的抽提步骤，直到离心后中间层没有白色的蛋白出现为止。
8.在上清液中加入等体积的自备的*仿，轻轻震摇5分钟，3500rpm离心5分钟，转移上清液到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。此步可以除去残留的酚。
9.在上清液中加入0.1倍体积的自备的3 M 乙酸*溶液(pH5.2)和2倍体积的无水乙醇，轻柔颠倒混匀，将出现絮状的DNA沉淀。
10. 用移液枪头将DNA沉淀挑取出来，转移到1.5mL的塑料离心管中，用75%的乙醇浸泡2次。此操作可以去除DNA中残留的盐离子。
11.转移DNA沉淀到一个1.5mL的塑料离心管中，空气中放置10分钟左右待乙醇挥发后，加入0.5mL自备的TE缓冲液溶解DNA，4℃放置待用。

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