北京现货端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)特价促销

保存条件 ：低温运输

保质期 ：长期

英文名 ：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit

库存 ：366

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)特价促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)特价促销
规格：50次
产地：国产|进口
英文名：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit
品牌：百奥莱博
本品是我司在经典TRAP技术基础上改良而得，专门用于快速测定人类细胞端粒酶的相对活性(需要跟对照样品比较)。端粒酶存在于85-90%的肿瘤组织中，因此通过检测端粒酶活性就能早期诊断大多数肿瘤。目前最常用的检测端粒酶活性的方法就是TRAP，它利用端粒酶能在外加的TS模板DNA的末端添加不同数量的TTAGGG序列这一特点，通过PCR检测延伸产物而高效检测端粒酶活性。原理如下：


产品特点：
1．一站式，提供从细胞裂解到PCR的所有试剂，但不含PAGE和银染试剂。
2．一管式操作，端粒酶延伸和PCR在同一体系中完成，方便快捷。
3．提供改良的、长为150bp的内参和含8个端粒序列的合成端粒，可有效排除PCR假阴性。内参长度远大于TRAP产物，不会干扰结果分析。
4．改良的TS模板和PCR引物，极大降低了引物二聚体的形成。
5．既可用于培养细胞，也可用于实体组织。
6．灵敏度高，最低可以检测到10个肿瘤细胞中的端粒酶活性。

试剂盒组成：

 

成分	规格
TRAP细胞裂解液	10mL
PCR Mix 3.0	1.5mL
合成端粒(PC)	50μL
TS-引物混合物(含内参)	300μL
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、端粒酶的提取
注意：端粒酶是蛋白质和RNA组成的复合体，RNA极容易被降解，因此，提取端粒酶应该跟提取RNA一样，尽量在低温条件下快速操作，并且必须使用RNase-free的耗材，桌面最好用固相RNase清除剂清洁(BTN3090)清洁。
1．对冷冻的实体组织：将50-100mg冷冻组织在液氮中用预冷的研磨器研磨成粉末，再转移到预冷的玻璃匀浆器中，加入200μl预冷的TRAP细胞裂解液，温和手动匀浆数次后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次，然后直接进入第3步操作。为保证裂解效果，可在显微镜下观察。如果组织样品不足50-100mg，可以按比例降低TRAP细胞裂解液的用量。
2．对新鲜的培养细胞和组织：用自备的预冷PBS洗涤105-106个经过胰酶处理的细胞或50-100mg新鲜组织，3000g 4℃离心5分钟，弃上清；加入200μL预冷的TRAP细胞裂解液悬浮细胞或组织。对细胞：涡旋振荡10秒后置冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。对组织：在冰上用玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。如果细胞不足1×106或50-100mg，可按比例降低TRAP裂解液的用量。
3．12000-14000g 4℃离心20分钟。
4．收集160μL上清，先取部分用于测定蛋白质浓度，可通过测定215nm和225nm的光吸收得到，计算公式是蛋白质浓度(μg/μL)=0.144×(A215-A225)×稀释倍数，也可使用BCA法测定蛋白浓度。本试剂盒制备的细胞裂解物的蛋白浓度一般在10-750 ng/μL。知道各样品的蛋白浓度后，可用TRAP细胞裂解液将各样品的蛋白浓度调成一样便于比较，然后按10μL/管分装得到至少15管裂解物，放-80℃冷冻保存(可存放一年)。每个样品可取一管进行热灭活(95℃处理10分钟)后再放-80℃冷冻保存，此管将作为该样品的阴性对照。

二、TRAP反应
5．确定每个TRAP反应的细胞裂解物用量：为便于分析比较，每个TRAP反应所用的蛋白量(或细胞数)必须一样。由于细胞裂解物中一般都有高浓度的不明Taq DNA聚合酶抑制物(TRAP失败最常见的原因)，因此最佳结果往往是用稀释10-1000倍后的细胞裂解物得到。建议用一个样品稀释不同浓度做TRAP预实验。
6．在PCR管中按下表设置TRAP反应(50μL反应体系，以A和B两个样品为例)：

成份	A样品管	A阴性 对照管	B样品管	B阴性 对照管	实验 阴性对照	实验 阳性对照
A样品	2μl	-	-	-	-	-
A阴性对照	-	2μl	-	-	-	-
B样品	-	-	2μl	-	-	-
B阴性对照	-	-	-	2μl	-	-
TRAP细胞裂解液	-	-	-	-	2μl	-
合成端粒	-	-	-	-	-	2μl
TS引物混合物	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl
PCR Mix	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl
超纯水	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl

 注：为避免污染，最好等其他样品加完并盖上盖后再加合成端粒。
7．吹打混匀后进行PCR扩增，扩增条件(仅供参考，用户可优化)如下：

步骤	温度	时间
端粒酶延伸	30℃	30min
端粒酶灭活	95℃	5min
PCR(循环35次)	94℃	30s
	55℃	60s
	72℃	30s

三、PAGE-银染检测及结果解读(本试剂盒不含PAGE-银染检测试剂盒)
8．取5μL PCR反应液进行10%非变性PAGE电泳-银染显色实验(需另购本公司PAGE电泳套装和银染试剂盒)。如果背景高(主要是由反应体系中的蛋白成分引起)，可以先进行PCR产物纯化再进行PAGE电泳和银染。
9．跟预期结果(见下表)比较。如果结果跟下表不一致，则需要按具体情况分析原因。

现象	样品管结果	样品阴性 对照结果	实验阴性 对照结果	实验阳性 对照结果
典型TRAP条带 (条带数不限)	有则有端粒酶活性 无则无端粒酶活性	不出现	不出现	不出现
阳性对照的TRAP 条带(仅8条带)	不出现	不出现	不出现	出现
150bp内参	可出现可不出现	出现	出现	出现

 注：本试剂盒所用引物产生的典型TRAP条带最小条带为59bp。

疑难解答：
1．如果样品管有内参带，但没有TRAP条带，可能是端粒酶活性低或者失活。制备细胞裂解物时可在TRAP细胞裂解液中加入1/100体积的RNase抑制剂以抑制RNase活性，并在端粒延伸反应后增加DNA纯化一步，纯化后的DNA再用于PCR。此两步法TRAP需要用户自备DNA纯化试剂和dNTP。
2．如果样品对照管(端粒酶已经灭活)出现TRAP条带，可能是TRAP产物污染，需要使用洁净的PCR管和PCR试管架。样品制备、PCR设置和电泳需在不同房间进行。也可能是端粒酶没有彻底灭活，建议用RNase酶解法或酶解+热灭活法。
3．实验阴性对照管的实验结果中出现TRAP条带，可能是引物二聚体，可采取两步法TRAP，并且将DNA模板加入到70℃预热的PCR Mix3.0中再进行PCR。
4．实验结果不好时，可以直接采取2步法，先做端粒酶延伸和灭活，然后再纯化DNA，用纯化的DNA做PCR。此法需要用户自备dNTP。

更多有关北京现货端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)特价促销的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·生物素化山羊抗亲和素
编号：BTN131103
英文名称：Biotin Goat Anti Avidin Antibody
规格：0.5mg
本产品为生物素标记的山羊抗亲和素抗体，通过抗原表位或生物素结合位点与亲和素结合。本产品可以用来放大荧光信号。也是组织染色或细胞分选分析应用的理想选择。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·柱式酱油DNA提取试剂盒
编号：BTN130956
英文名称：Soy sauce DNA column extraction kit
规格：10次
本产品为生物素标记的山羊抗亲和素抗体，通过抗原表位或生物素结合位点与亲和素结合。本产品可以用来放大荧光信号。也是组织染色或细胞分选分析应用的理想选择。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·无机焦磷酸酶(PPase)(酵母)
编号：BTN130658
英文名称：Inorganic Pyrophosphatase(yeast)
规格：10U
无机焦磷酸酶催化无机焦磷酸盐水解生成正磷*(代"酸")盐，转录过程中可提高RNA的产量，其反应原理如下：


产品组成：

组份	规格
无机焦磷酸酶(100U/mL)	100μL
10×Buffer	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指标准反应条件下，[0.5ml反应体系中，100mM Tricine(pH7.2),2mM MgCl2和2mM PPi，于25℃反应10分钟]每分钟催化从无机焦磷酸盐生成1μmol磷酸盐的酶量。



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腺嘌呤 PAR 73-24-5
百里酚酞 Adenosine Deaminase 125-20-2
BL1137 BL21(DE3)感受态细胞
BFD036 磺胺七合一快速检测试剂盒
PY02-333  改良月桂基硫*(代"酸")盐胰蛋白胨(MLST)肉汤基础  250克  
ARB10520 人白细胞介素8(IL-8)含量分析 Human interleukin 8,IL-8ELISA KIT
ARB11957 大鼠Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)检测服务 Rat collagen type Ⅲ,col Ⅲ ELISA KIT
ARB11671 人维生素D受体(VD R)含量检测 Human vitamin d receptor,vd r ELISA KIT
CYB164041 BSA-HRP
ARB14158 人胱硫醚β-合酶(CBS)定量分析 
DL-焦谷*酸 Bismuth citrate 149-87-1
2′-脱氧胞苷 TMB 951-77-9
F020224 兔抗大鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Rat IgG
ARB11385 人活化素A(ACV-A)ELISA检测服务 Human activin a,acv-a ELISA KIT
ARB10365 人末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)elisa检测说明书 Human terminal complement complex c5b-9,tcc c5b-9 ELISA KIT
8008-63-7 猪胆盐
ARB11008 人补体片断3A(C3A)含量分析 Human complement fragment 3a,c3a ELISA KIT
ARB13274 小鼠碳酸酐酶2(CA-2)酶标法分析 Mouse carbonic anhydrase 2,ca-2 ELISA KIT
BL1289 8％多聚甲醛
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·酪蛋白溶液(PBS)
编号：BTN131105B
英文名称：Casein Blocking Solution(PBS)
规格：250mL
即用型酪蛋白(1%)用于封闭非特异性位点。
A型：溶于TBS的Hammarsten级酪蛋白，Kathon防腐剂，pH7.4。
B型：溶于PBS的Hammarsten级酪蛋白，Kathon防腐剂，pH7.4。可用于在使用牛奶封闭背景高时作为替代品使用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·Bouin固定液
编号：BTN130819
英文名称：Bouin Fixative Solution
规格：250mL
Bouin氏液是组织化学中最常用的混合型固定液之一，由苦味*(代"酸")饱和液(1.22%)、甲醛和冰醋酸按15:5:1的比例混合而成。此固定液对大多数组织固定效果良好。

产品特点：
1．其渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，染色效果好。
2．适用范围广，特别适合于富含结缔组织的标本和胚胎标本。能够软化皮肤角质，并可以用于植物组织的固定。
3．因为本产品含有苦味*(代"酸")，会溶解火棉胶，所以如果用于火棉胶包埋，必须进行洗脱苦味*(代"酸")处理。
4．标本尺寸不可太大，一般窄边不大于5mm。

储存条件：常温运输及保存，保存期为一年。

使用方法：
1．标本修块，厚度一般不超过5mm，置入本产品内固定8～24h(根据样品材料、大小不同，固定时间可能会有较大差异)。
2．固定后用70%～80%乙醇洗涤。

我公司生产供应销*(代"售")的基因结构和功能产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购北京现货端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)特价促销。