产品详情
文献和实验
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保存条件 :低温运输
保质期 :长期
英文名 :SuperTOPO Blunt Cloning Kit
库存 :792
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒多少钱是高品质的克隆与表达产品,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。
名称:北京SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒多少钱
规格:25次
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
编号:BTN160684-25K
本试剂盒是基于Topoisomerase能够在几秒钟之内高速连接DNA片段的原理开发的无背景克隆试剂盒,它使用了本公司通过定点突变改良的TOPO酶,连接效率比野生型更高。
产品特点:
1.高效快速,连接反应几乎在几秒钟内完成,连接率几乎达到100%。
2.适用于pfu、KOD等高保真聚合酶扩增的平末端片段的克隆。
3. 无杂带或引物二聚体的PCR扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。
4. 零背景,无需IPTG-X-Gal蓝白斑筛选,故不需要IPTG-X-Gal培养基。
5. 本试剂盒按10μL标准反应体系,有25次和50次两种规格包装供选择。
6. 提供含Amp和Kan两种抗性的载体供选择(BTN160684-25A是含Amp抗性TOPO载体,BTN160684-25K是含Kan抗性TOPO载体)。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
SuperTOPO-Amp Blunt载体 | 25μl(BTN160684-25A) |
SuperTOPO-Kan Blunt载体 | 25μl(BTN160684-25K) |
连接缓冲液 | 25μl |
M13F引物 | 50μl |
M13R引物 | 50μl |
超纯水 | 1ml |
说明书 | 1份 |
注意:BTN160684-25A提供SuperTOPO-Amp Blunt载体,BTN160684-25K提供SuperTOPO-Kan Blunt载体。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 如果是PCR 制备插入片段,所用引物不能磷酸化,使用pfu、KOD等产生平末端片段的高保真DNA聚合酶。为保证扩增产物的完整性,PCR循环结束后,再延伸5-10分钟,确保片段延伸完全。
2.电泳检测并相对定量PCR片段(跟DNA marker 比较)。根据插入片段长度和下表确定每次连接反应需要的最佳用量:
插入片段长度 | 最佳用量 |
100-1000bp | 20-50 ng |
1000-2000bp | 50-100 ng |
2000-5000bp | 100-200 ng |
3.在一个干净的塑料离心管中,室温下(不要放在冰上)设置如下连接反应体系:
成分 | 用量 |
纯化后的PCR产物 | 不超过8μl(详见注意事项) |
SuperTOPO-Amp Blunt载体或 SuperTOPO-Kan Blunt载体 |
1μl |
连接缓冲液 | 1μl |
超纯水 | 补到10μL |
注意:如果使用未经纯化的PCR产物,则需要加入量不能超过1μL,否则PCR 体系会干扰连接体系。
4. 轻柔吹打混匀后,短暂离心,常温(20-30℃)放置0-5分钟。如果在冬天室温低于20℃,建议使用25℃水浴或金属浴。注意:连接时间超过5分钟的话连接效率会降低。
5. 如果当天不转化,可以将离心管放-20℃保存。如果转化,则取5μL连接液加到50-100μL 刚刚融化的感受态细胞中,轻柔混匀。注意:本产品要求感受态细胞的转化效率不得低于5×10E7cfu/ug。
6. 如果片段长度小于2Kb,则不需要冰浴和热激,直接在离心管中加入500μL 不含抗菌素的SOC或LB培养基,然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后,弃掉大部分上清,只留约100μl左右,然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上,37℃过夜培养。
7. 如果片段长度长于2Kb,则按常规转化方式,先冰浴2-30分钟,然后42℃热激30秒,冰上防放置2分钟,再在离心管中加入500μl 不含抗菌素的SOC或LB培养基,37℃ 250rpm培养60分钟,然后取200μL 涂盘。也可以先3000g离心2分钟后,弃掉大部分上清,只留约100μL左右,然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-AmpBlunt载体)或Kan(对SuperTOPO-Kan Blunt载体)的培养皿上,37℃过夜培养。
8. 用M13F/M13R通用引物进行菌落PCR或直接测序来鉴定重组子。
更多有关北京SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒多少钱的价格及使用说明等,请联系我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
·长片段Taq DNA聚合酶
编号:BTN130910
英文名称:Long-Taq DNA Polymerase
规格:500U
本产品由在普通Taq DNA聚合酶进行基因工程优化的快速DNA聚合酶基础商制成的混合酶,配以专为长片段PCR优化的反应缓冲液,特别适合对长片段的扩增。LF-Taq扩增性能优异,能在短时间内完成高效的PCR扩增.用普通Taq DNA聚合酶的进行PCR反应延伸时间一般为1kb/min,快速DNA聚合酶为1kb/10-15 sec,进行8kb产物的PCR反应可在1小时内完成。LF-Taq对简单模板的扩增可达40kb,对复杂模板的扩增也可达20kb.本制品使用国际领先生产工艺生产,经过两次过柱纯化,纯化>98%,完全去除外源蛋白和核酸污染。
产品特点:
1.为长片段扩增特别优化,使用常规PCR Buffer即可扩增8-10kb,使用超长Buffer扩增长度可达20-40kb。
2.反应速度快,聚合速度高达10-15sec/kb,可为科研人员节约多达70%的实验时间。
3.扩增效率高,同等条件下产量远高于普通Taq酶,在扩增片段时优势尤其明显。
4.比活性高,分子量小于普通Taq酶。在相同酶量下有更高的酶活性。
5.低背景,显著减少非特异性条带和引物二聚体。
6.高稳定性,耐热性能,Long-Taq酶的T1/2=2.5-3小时(100℃),12小时(95℃),普通Taq酶的T1/2=1.6小时(95℃),特别适合对高GC含量的模板的扩增。
产品组成:
组分 | 规格 |
Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 0.1mL |
10×PCR Buffer | 1mL |
使用手册 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,保存期为一年。
北京SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒多少钱关键词:BTN160684-25K,SuperTOPO Blunt Cloning Kit ,SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒
9012-90-2 Taq DNA 聚合酶
D-虫荧光素* 2-Nitrobenzaldehyde 103404-75-7
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1320-06-5 Oil Red O 油红O
羟高铁血红素 Boc-L-glutamine 15489-90-4
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北京SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒多少钱关键词:BTN160684-25K,SuperTOPO Blunt Cloning Kit ,SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒
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