产品详情
文献和实验
相关推荐
保存条件 :-20℃保存、有效期一年。
保质期 :一年
英文名 :T7 in vitro Transcription Kit
库存 :389
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应北京现货T7体外转录试剂盒打折促销,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:T7体外转录试剂盒
英文名:T7 in vitro Transcription Kit
品牌:百奥莱博
编号:BTN91106
本试剂盒是基于T7 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒,它利用含有T7启动子的模版DNA,以NTP为底物,从T7启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA,简单快速获得大量的RNA分子。
产品特点:
1. 即开即用,用户只需提供含T7启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验,不需要单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液,减少加样次数,避免了操作误差,增加了可重复性。
3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA,也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。
5.产品配方经过精心优化,每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
6. 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
转录预配液(2×) | 0.5mL |
阳性对照DNA(1.3 Kb片段) | 20μL(10ng/μL) |
T7 RNA聚合酶 | 50μL |
RNase-free水 | 1mL |
说明书 | 1份 |
储存条件:-20℃保存、有效期一年。
使用方法:
一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂,此处信息仅供参考)
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板,但是必须注意以下几点。
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA,则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)是需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物,则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上,则需要选择有T7启动子的载体,并且克隆位点必须位于T7启动子一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂,此处信息仅供参考)
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板,但是必须注意以下几点。
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA,则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物,则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上,则需要选择有T7启动子的载体,并且克隆位点必须位于T7启动子下游。
3)需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(比如选择了Pst I来线性化质粒),则最好用T4 DNA聚合酶修平。
4)必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A,因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染,所以在用作模板前,最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温,然后电泳检测RNA是否被降解,以此来判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中,在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分:
成分 | 加入量 | 备注 |
DNA模板 | 如果使用质粒DNA,必须反复酚-*仿抽提去除残留的RNase,然后再乙醇沉淀质粒DNA需室温时使用 | |
PCR片段 | 50ng左右 | |
质粒DNA | 1μg左右 | |
阳性对照 | 4μL | |
转录预配液,2× | 10μL | |
T7 RNA聚合酶 | 1μL | |
RNase-free水 | 补水到20μL |
注:此为20μL反应体系的用量,对其他反应体系,各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针,则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA,则需要加入自备的加帽修饰核苷酸。
2. 37℃保温1-2小时。注意:延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活T7 RNA聚合酶。
4. 取1-3μl电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。
三、去除DNA模板(所需试剂可从本公司另购)
1.在体外转录体系中加入1μL自备的RNase-free DNase(3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL。
4. 用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5. 加自备的200μL微量核酸沉淀剂(用前需要摇晃混匀),振荡后15000rpm离心3~5分钟,弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇,震荡10秒后15000rpm离心3~5分钟,弃上清。
7. 短暂离心数秒,用枪头吸弃上清。
8. 晾干,所得沉淀即体外转录所得的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。
疑难解答:
1、没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染,可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温,再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量,本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor,如果模板RNase污染严重,可能需要用户补加RNase inhibitor。
2、RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G,在前14个碱基内避免有U存在。
3、RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有T7 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。
4、RNA长度比预计的长。T7 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样,有不依赖于模板的加尾功能,最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多,使用的模板又是质粒DNA,则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5、5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP,则得到的RNA是三磷酸,体外转录时如果保温时间太长(如12小时),则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP,则T7 RNA聚合酶将优先使用GMP,所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。
关键词:T7 in vitro Transcription Kit,BTN91106,T7体外转录试剂盒
我公司的北京现货T7体外转录试剂盒打折促销,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
编号 | 名称 |
BTN100842 | EDTA溶液(0.5M,pH8.0)(DNA级) |
BTN100930 | 硝酸纤维素膜 |
BTN70902 | 5M甜菜碱溶液,PCR级 |
BTN80905 | 大提柱式细菌RNA提取试剂盒 |
BTN80926 | 柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法) |
BTN140650 | 3mL亲和层析柱 |
BTN120401 | 热启动Taq DNA聚合酶 |
BTN131230 | DNase I干粉 |
BTN80918 | Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH8.5)(RNase-free) |
BTN131190 | 糖原溶液(10mg/mL)(分子生物学级) |
BTN111008 | 非酶多糖清除剂(DNA专用) |
BTN60912 | 非酶RNA清除剂2.0 |
BTN130645 | 8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1) |
BTN80202 | PAGE胶DNA柱式回收试剂盒 |
BTN130855 | T4 RNA连接酶2(双链RNA连接酶) |
BTN101207 | 1M Tris-HCl(pH8.5)(DNA级) |
BTN100811 | 质谱兼容型蛋白银染试剂盒 |
BTN131207 | 小牛胸腺DNA溶液 |
BTN160688 | 大肠杆菌TKB1化学感受态细胞 |
BTN131102 | 生物素化兔IgG |
BTN130897 | YPDG液体培养基 |
BTN70503A | DNA marker(50-500bp) |
BTN90602G | DNA marker(pBR322/BstN I) |
BTN130628 | λ核酸外切酶 |
BTN81217 | 微量蛋白沉淀试剂盒 |
BTN131095 | 生物素化的辣根过氧化物酶 |
BTN131007 | 中等RIPA裂解液 |
BTN90314 | 柱式尿液DNA提取试剂盒 |
BTN131125 | 辣根过氧化物酶(偶联级) |
BTN121104 | 改良型天狼猩红染色试剂盒 |
BTN60705 | 一管式植物DNA提取试剂盒 |
BTN130637 | Tma核酸内切酶III |
BTN60204 | 非酶多糖清除剂(RNA样品专用) |
BTN81224 | BCIP/NBT显色试剂盒 |
BTN130884 | 糖蛋白蛋白纯化试剂盒 |
BTN131198 | 一步法96孔板质粒DNA提取试剂盒(真空法) |
北京百奥莱博科技有限公司
实名认证
钻石会员
入驻年限:9年