全基因合成

全基因合成（基因合成服务）

欣百诺在分子生物学实验及重组蛋白制备方面都有着丰富的经验，以重组蛋白制备为核心，为客户提供可靠的分子生物学技术服务，主要包括：基因合成、基因克隆、载体构建、定点突变（单点及多点突变）、DNA操作（片段缺失及拼接等）及质粒大量制备。

·基因合成   步骤 1. 表达系统选择及方案设计（此项服务免费）
根据客户所需的要求，推荐最适合的表达系统（大肠杆菌/酵母/昆虫细胞/哺乳动物细胞表达系统）。
根据客户选择的表达系统，推荐密码子优化方案。
设计最佳的表达载体构建（是否融合表达、是否添加Tag等）及相应的蛋白纯化方案 。
提供客户：各种建议方案
时间：1~3工作日

·基因合成   步骤2. 获取目标基因DNA序列
从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。
根据选定的表达系统对cDNA进行密码子优化。
合成设计好的基因序列或通过基因克隆的方式获得基因序列。
提供客户：目标基因（在T载体或常规克隆载体上）及测序报告
时间： 2~3周

·基因合成   步骤3. 表达载体构建
选定的标签序列/Tag （可选用的Tag见下表）按同一读码框融合于标基因的5’，3’端（亦可融合在基因编码序列中，融合位置需专门设计），也可利用载体上自带的标签序列而无需另外添加。

标签序列/Tag列表

 

Taq名称	用途
HIS	亲和纯化
GST	亲和纯化
MBP	亲和纯化
Nus	增加蛋白可溶性
trxA	提高蛋白表达量
Myc	表达检测
FLAG	表达检测
HA	表达检测
GFP等荧光蛋白	表达检测

将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
测序验证构建质粒的准确性。

 

可提供的表达载体（若需特殊的表达载体或启动子序列，需由客户提供）：

大肠杆菌表达体系载体

 

Expression Vector	Promoter	载体所含Tag
pET3a, pET11a, pET24a	T7/ac	None or T7 Tag
pET32a	T7/ac	TRX & HIS
pET41a	T7/ac	GST & HIS
pET22b, pET25b, pET26b	T7/ac	Secret
pET28a, pET15b, pRSETb	T7/ac	HIS
pET50b, pET43a	T7/ac	Nus, HIS
pPEPTIDE	T7/ac	HIS
pMAL-c2x	T7/ac	MBP
pGEX4T, pGEX5X, pGEX6P	T7/ac	GST
pQE30	T5	HIS
pTrcHisB	Trc	T7, HIS
pTWIN	T7/ac	Intein, CBD
pBV220	PRPL	None

 

 

酵母表达体系载体
Expression Vector	Promoter	载体所含Tag
pPICZα	AOX1
pPIC9K	AOX1
PGAPZα	GAP
pYES2/CT	GAL1
昆虫细胞表达体系载体
Expression Vector	Promoter	载体所含Tag
Bacmid DNA
哺乳动物细胞表达体系载体
Expression Vector	Promoter	载体所含Tag
pcDNA3.1	CMV
pcDNA4.0	CMV
EGFP	CMV	EGFP

 

提供客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告
时间：1周

·基因合成   步骤4. 质粒大规模柱纯化服务
我们采用国外进口的DNA纯化填料，通过柱纯化方式纯化提取质粒，可为客户提供高纯度质粒，并可根据需求进行去内毒素处理。可对质粒进行大规模柱纯化，提供客户1mg至克级以上的纯化质粒。
提供客户：纯化质粒，对于要求去内毒素的质粒提供鲎试剂检测报告
时间：1周