RNA提取试剂 RNA纯化

保存条件 ：冷藏

保质期 ：12个月

英文名 ：RNA Extraction Reagent

库存 ：976

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖RNA提取试剂 RNA纯化在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：RNA提取试剂 RNA纯化
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：100ml
英文名：RNA Extraction Reagent
本试剂是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，可以提取细菌、植物、动物组织和细胞以及新鲜血液的总RNA。提取的总RNA可用于Northern blot、RT-PCR、Dot blot、RNase保护分析等分子生物学实验。

产品特点：
1 分相明显：本试剂为粉红色，便于*仿分相后区分水相和有机相。
2 结果可靠：该试剂含有强烈抑制RNase活性的物质，可靠保护RNA不降解。
3 价廉物美：其提取效果与国外进口产品相媲美，价格却低于它的三分之一。

自备试剂及耗材：
*仿、异丙醇、75%乙醇(用RNase-free 水配制)、RNase-free的水、RNase-free的耗材(Tip头，离心管等)。

操作步骤：

1、匀浆处理
组织中提取总RNA：
a.植物组织：植物叶片直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg植物叶片加入1ml RNA 提取试剂。
b.动物组织：按10-30mg组织加入1ml RNA 提取试剂，用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆。
培养细胞中提取总RNA：
a.贴壁细胞：无须胰酶消化，可直接用RNA 提取试剂进行裂解，每10cm2培养面积加1mlRNA 提取试剂。
b.悬浮细胞：可直接离心收集、裂解，每1ml RNA 提取试剂可裂解5×106动物或酵母细胞，或107细菌细胞。
血液中提取总RNA：
直接取新鲜的血液，加入3 倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，9,000 g离心1分钟。彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。每100-200μl血液收集的白细胞沉淀加入1ml RNA提取试剂。

2、分层(Phase Separation)
根据样品，选择使用方法A或者方法B。如果不确定，则使用方法 B。
A、(细胞，血液，一般动物组织)
室温静置5 分钟，再按照1 ml RNA 提取试剂使用200μl的比例加入*仿，用力颠倒离心管以混匀；室温静置3 -5 分钟使之分层后，4℃ 12000g 离心15
分钟。
B、(植物，脂肪及肝脏等某些杂质含量较高的样品)
室温静置5 分钟后，4℃条件下12000 g 离心10 分钟，将上清移入另外一个离心管中。再按照1 ml RNA提取试剂使用200μl 的比例加入*仿，用力颠倒离心管以混匀。室温静置2 - 5 分钟使之分层后，4℃条件下12000 g 离心15 分钟。
注意：
·4℃ 离心对于降低基因组DNA 的污染是很重要的。
·杂质含量高的样品一定要使用2-B 操作。2-B 操作不仅可以将大部分杂质离心去除，也可以将大片段的基因组
DNA 离心去除，方便加入*仿后的分层，不过，如果想同时抽提总RNA 和基因组DNA，则使用2-A 操作。
·加入*仿后的混匀是非常重要的，否则静止分相易出现分相倒置，即水相在离心管下部而有机相在上部。不推荐振荡混匀，而推荐直接用手混匀：将管底斜向朝上，手斜向快速摇动，使体系成粉色乳状。

3、RNA沉淀(RNA Precipitation)
小心将上层水相(通常可吸取550μl)移至另外一个离心管中，再加入等体积冰冷的异丙醇混匀，室温放置10 - 20 分钟，4℃12000g 离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底。
注意：
·中间层和红色下层置于 4℃ 保存，以便接下去抽提基因组DNA。
·用冰冷的异丙醇能更迅速的沉降RNA。
·取上层水相时要特别小心，绝对不要吸入白色中间层及红色下层。移取水相时要使用小体积移液器：200μl 移液器，Tip 的尖嘴要贴在管壁，慢慢松手吸出液体。
·对于脂肪类组织，包括脑组织，在上清的最上层为脂肪，取上清时不要吸入，必要时用等体积*仿对上清再抽提一次。
·如果是杂质含量高的样品，强烈建议将此步操作改为：在上清中加入一半体积的异丙醇，混匀后，再加入一半 (指上清) 体积的RNA 沉淀试剂(1.2M NaCl，0.8M 柠檬酸*)。再混匀后，室温放置10 – 20 分钟。
·弃上清后，将离心管置于离心机中离心数秒，再用移液器将残留液体小心吸出。这是最彻底的去除上清的方法，比倒掉上清后再将离心管倒扣在吸水纸上的方·法可靠得多。如果是杂质含量高的样品，强烈建议增加此步操作。如果肉眼看不见沉淀，则不要用移液器吸。

4、RNA漂洗(RNA Wash)
a.RNA 沉淀中加入1ml 75%乙醇(用RNase-free 水配制)，温和振荡离心管，悬浮沉淀。每1ml RNA提取试剂加入1ml 75％乙醇。
b.4℃ 7,500 g离心5min，弃上清。
注：转速不要高于7,500g，否则得到的RNA不易溶解。
c.短暂快速离心，用移液器小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。室温放置1-2分钟晾干沉淀。
注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。

5、溶解RNA(Redissolving the RNA)
根据需要，沉淀中加入适量(一般可加50-100μl)RNase-free 水，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。

储存条件：2～8℃，避光，有效期12个月。

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RNA提取试剂 RNA纯化关键词：RNA Extraction Reagent,RNA提取试剂,RFT034


·5×加A反应液
编号：RFT097
英文名称：5×A-plus MasterMix
规格：20次(200μl)
本品由pfu、Pwo、Vent或KOD等有3’→5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物为不带A尾的平末端DNA片段，如该平末端DNA片段需要和T载体相连接，需要先利用加A反应液在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接。本MasterMix提供了加A尾需要的所有成分，可以在20分钟左右完成整个过程。用于平末端片段的加A反应。

使用方法：
1、平末端PCR产物用PCR产物纯化试剂盒(无非特异扩增；货号RTP2202)或凝胶回收试剂盒纯化(有非特异扩增，货号RTP2201)回收。
2、纯化后的平末端DNA片段按照以下反应体系加A，全量为50μl：
平末端DNA片段——————0.5～5μg
5×加A反应液-——————10μl
ddH2O——————————up to 50μl

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。

·λDNA/HindIII(125～23130bp)
编号：RFT026
英文名称：5×A-plus MasterMix
规格：100次(2×25μg/2×250μl)
本产品是由λDNA经HindIII完全酶切而成，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。产品浓度为0.1μg/μl，已含有1×loading buffer，可直接取2-5μl上样，使用方便。8条带的大小分别为125，564，2027，2322，4361，6557，9416，23130bp。



使用方法：
1.65℃加热5分钟，立即冰浴3分钟，取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中。
注：根据梳子的厚度和宽度进行上样。每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl。窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl；宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子，可以适当调整上样量。
2. 建议电泳条件：凝胶浓度为1.0％，凝胶长度10cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间45分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。

注意事项：
1. λDNA酶切Marker的末端容易由COS末端结合在一起，电泳前65℃预热5分钟能解开结合的COS末端，得到更清晰的电泳图像。如果不预热，23130bp和4361bp会结合形成27491bp的额外片段，同时电泳后4361bp亮度会明显弱于其他片段。
2. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
3. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。


RNA提取试剂 RNA纯化关键词：RNA Extraction Reagent,RNA提取试剂,RFT034


·2×pfu PCR MasterMix
编号：RFT093
规格：500μl|5×500μl
本品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为2×。使用时，只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应，可最大限度的减少人为误差，具有快速简便、稳定性好等优点。用于高保真的DNA片段的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物为平滑末端，不可以直接用于TA克隆，要通过平滑末端克隆法进行克隆。以50μl PCR反应体系为例，每次使用25μl 2×MasterMix，500μl可做20次 50μl PCR反应。

质量控制：以λDNA为模板，可以很好扩增5kb的DNA片段；以水稻基因组为模板，可以很好扩增3.2kb的DNA片段。

使用方法;
1、冰浴中彻底融化2×MasterMix，混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

 

	50μl反应体系	终浓度
2×MasterMix	25μl	1×
上游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
下游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
模板	×μl	10pg-1μg
水	补至50μl

3. 快甩离心将反应液收集到管底。
4、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
5、PCR仪上执行以下程序：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	Tm-5℃*	30 sec
延伸	72℃	0.5kb/min
最后延伸	72℃	5 min	1

注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
6、电泳检测。
注：使用含染料的2×MasterMix可以直接上样；不含染料的2×MasterMix要与6×loading buffer混合后上样。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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