Hieff NGS cfDNA回收磁珠(100-200 bp)

保存条件 ：2-8℃

保质期 ：有效期1年

英文名 ：Hieff NGS cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

库存 ：大量

供应商 ：翌圣生物科技(上海)股份有限公司

CAS号 ：点击查看

规格 ：1 mL

产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)	12599ES03	1 mL	4℃	466.00
Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)	12599ES08	5 mL	4℃	1666.00
Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)	12599ES56	60 mL	4℃	9106.00

产品描述
    cfDNA提取过程中，常会引入大片段DNA或gDNA的污染。常规情况下，这些污染物可以通过对目的片段进行磁珠分选回收而去除。但是，由于cfDNA仅有170 bp左右，常用的AMPure XP或SPRI Select磁珠对100-200 bp的回收效率较低，无法获得理想的cfDNA回收效果。

    Hieff NGS^TM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)是针对上述问题的解决而专门设计的磁珠类产品，其基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理制备，配合精心优化的缓冲体系和已经验证的操作体系，可精确回收100-200 bp cfDNA，有效去除大片段DNA和gDNA的污染，同时具有操作简单、回收率高（>95%）等优势。使用本品获得的cfDNA产物，可直接应用二代测序文库构建、克隆、酶切、连接等反应。本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
运输与保存方法
冰袋运输。2-8℃保存，效期一年。避免冷冻！
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）磁珠使用前须在室温平衡至少30 min。
3）80%乙醇需现用现配，否则将影响回收效率。
4）进行长度分选时，初始样品体积需≥50 μL，不足时请用超纯水补齐。样品体积太小，将导致移液误差增大，进而影响分选的准确性。
使用方法
1. 准备工作
将磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。
2. 长度分选（双轮法）
长度分选操作流程如图1所示，具体操作如下。
图1 双轮分选操作流程。
 
表1磁珠cfDNA片段回收推荐比例

cfDNA片段长度	100-200 bp
第一轮体积比（Beads:DNA）	0.47×
第二轮体积比（Beads:DNA）	0.33×

注：“×”表示样品DNA体积。若样品DNA体积为100 mL，则第一轮磁珠使用体积为0.47×100 mL=47 mL；第二轮磁珠使用体积为0.33×100 mL=33 mL。
1）请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。
2）根据要求，参考表1向DNA溶液中加入第一轮分选磁珠，涡旋混匀或移液器吹打10次混匀。
3）室温孵育5 min。
4）将离心管短暂离心并置于磁力架中，待溶液澄清后（约5 min），小心转移上清到干净的离心管中。【注意：转移上清时，请勿吸取磁珠，即使微量残留都将影响后续文库质量。】
5）参考表1向上清中加入第二轮分选磁珠。
6）涡旋混匀或移液器吹打10次混匀，室温静置5 min。
7）将离心管短暂离心并置于磁力架中，待溶液澄清后（约5 min），小心移除上清。
8）保持EP管始终处于磁力架中，加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec，小心移除上清。
9）重复步骤8。
10）保持离心管始终处于磁力架中，开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂（约5 min）。【注意：切记磁珠不要干燥时间太久，磁珠干燥过度将影响纯化效果。】
11）将离心管从磁力架中取出，加入适量ddH₂O（≥20 μL），涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀，室温静置5 min。
12）将离心管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后（约5 min），小心吸取上清至干净的管中，即完成分选。
3. 文库大小分选参考条件
使用Hieff NGS^TM cfDNA Clean Beads以0.47×/0.33×的双轮分选比例，回收100-200 bp DNA片段。结果显示：Hieff NGS^TM cfDNA Clean Beads的回收率高达95%以上（表2），且几乎完全去除了大片段污染（图2）。
 
图2. 模拟cfDNA纯化结果。
阴性对照为20 bp ladder和100 bp ladder等比例混合物（红色），使用cfDNA Clean Beads对混合物进行0.47×/0.33×分选（绿色和蓝色，平行重复）。
表2. 双轮回收后100-200 bp各片段的回收率统计。

DNA片段位置	片段信号值（FU）				回收率
	对照	0.47×/0.33×回收
P1	3.9	3.7	3.9	3.8	97.44%
P2	3.1	3.2	2.9	3.05	98.39%
P3	3.1	2.9	3.0	2.95	95.16%
P4	3.1	3.0	3.0	3.0	96.77%

HB170811