DNA 拓扑异构酶 I-DNA Topoisomerase I

保存条件 ：低温运输，-20℃保存

保质期 ：一年

英文名 ：DNA Topoisomerase I

库存 ：大量

供应商 ：上海钰博生物科技有限公司

规格 ：100U/盒

产品及特点：

DNA Topoisomerase I（DNA 拓扑异构酶 I）来源于小牛胸腺，与来源于原核生物的酶性质不同，在无Mg2+的条件下也具有活性。而且，原核生物的DNATopoisomerase I只作用超螺旋分子的负链，而本酶则能使来源于超螺旋分子正负链均形成松散型，DNA Topoisomerase I催化4种反应：

1. 使环状超螺旋分子的超螺旋解开。

2. 在单链环状DNA分子内形成绳结（Knotting）和解开绳结（Unknotting）。

3. 催化具有互补碱基序列的环状单链DNA形成双链闭环状DNA分子。

4. 2个环状双链DNA分子之中的一个存在DNA链的切口时，发生两个分子的连结反应（Catenation）或者逆反应（Decatenation）。

DNA 拓扑异构酶 I-DNA Topoisomerase I反应条件

1X Buffer+BSA [50 mM KAc，20 mMTris-Ac，10 mM Mg(Ac)2，1 mMDTT (pH 7.9 @ 25℃)]。加入 100 μg/ml BSA。37℃ 温育。

Buffer 成分

10 mM Tris-HCl，35 mM (NH4)2SO4，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mMEDTA，50% Glycerol，pH 7.5 @ 25℃

DNA 拓扑异构酶 I-DNA Topoisomerase I备注

1. pBR322 DNA和φX174 DNA的RF I（超螺旋分子）用DNA Topoisomerase I反应后电泳，胶中含溴乙锭（EB）时，反应前后DNA带的位置不发生变化。这是因为由DNA Topoisomerase I作用而转换为松散型的DNA受EtBr的影响，再次变为超螺旋状态。因此，使用Topoisomerase I反应后，一般使用不含EB的琼脂糖凝胶电泳，电泳终了后再用EB染色。

2. 如果在10×添附Buffer中直接加入0.1%小牛血清白蛋白溶液，会产生大量的白色沉淀。因此，在反应液调制时需按以下顺序添加试剂：dH2O→10×反应缓冲液→0.1% BSA→底物DNA。

3. BSA在-20℃下易产生沉淀，应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。超纯 dNTP Mixture(2.5 mM each)    1ml
超纯 dNTP Mixture(2.5 mM each)    5×1ml
超纯 dNTP Mixture(10 mM each)    1ml
超纯 dNTP Mixture(10 mM each)    5×1ml
dATP 100mMsolution    0.25 ml
dCTP 100mM solution    0.25 ml
dGTP 100mM solution    0.25 ml
dTTP 100mM solution    0.25 ml
PCR enhancer    100μl
PCR enhancer    500μl
TUREscript H Minus M-MuLV Reverse Transcriptase （反转录酶）    5000U
    10000U
    10000U X 5
"TUREscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit                       （第一链反转录试剂盒）
"    25次
    50次
" TUREscript One Step RT-PCR Kit                                           （一步法反转录试剂盒）
"    25次
    50次
" TUREscript SYBR Green qRT-PCR Kit                             （两步法荧光定量反转录试剂盒）
"    25次
    50次
DNA MarkerⅠ（条带100.200.300.400.500.600）    50T
DNA MarkerⅠ（条带100.200.300.400.500.600）    500T
DNA Marker Ⅱ（条带100.300.500.700.900.1200）    50T
DNA Marker Ⅱ（条带100.300.500.700.900.1200）    500T
DNA Marker Ⅲ（条带300.500.800.1500.2000.3000.5000）    50T
DNA Marker Ⅲ（条带300.500.800.1500.2000.3000.5000）    500T
DNA Marker Ⅳ（条带500.1000.1500.3000.5000.8000）    50T
DNA Marker Ⅳ（条带500.1000.1500.3000.5000.8000）    500T