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文献和实验
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保存条件 :2-8°C不超过一个月,-80°C不超过12个月
保质期 :12个月
英文名 :Recombinant CD200 Receptor 1 (CD200R1)
库存 :20
供应商 :沪震生物
规格 :盒
产品名称:CD200R1重组蛋白
英文名称:Recombinant CD200 Receptor 1 (CD200R1)
英文简称:OX2R; HCRTR2; CD200R; MOX2R; MOX2 Receptor; Cell surface glycoprotein CD200 receptor 1; CD200 cell surface glycoprotein receptor; Cell surface glycoprotein OX2 receptor 1
物种:(Human,人);(Mouse,小鼠); (Rat,大鼠)等其它种属。
来源:原核表达
宿主:E.coli
性状:冻干粉
规格:10µg/50µg/200µg/1mg/1g
储存:避免反复冻融。2-8°C不超过一个月,-80°C不超过12个月。
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
如果需要有生物活性的蛋白,请参见活性蛋白。
重组蛋白质表达系统有以下三类,各有的特点:
原核表达系统 | 真核表达系统 | 无细胞表达系统 |
原核主要是大肠杆菌表达系统,方便,便宜,周期短,但有些蛋白会折叠不好,不带有糖基化等修饰。 | 真核包括酵母表达系统、杆状病毒-昆虫细胞表达系统、腺病毒表达系统等。一般能正确折叠,含有各种修饰。但价格高,周期长。 | 无细胞系统一般要靠公司来做,价格高。 |
表达系统 | 系统优缺点 | 系统蛋白表达方式 | 优点 | 缺点 | |
真核表达系统 |
哺乳动物细胞 |
表达的蛋白活性高,能够表达多复杂修饰 的蛋白;需要细胞房,无菌,成本投入高 |
瞬时转染 |
能够快速灵活的制备活性蛋白 | 蛋白表达量低,大量生产成本极高 |
稳定细胞系构建 |
筛选出的细胞株能够实验蛋白的大量生产 | 细胞株筛选困难且时间长,投入大 | |||
重组抗体表达 |
比普通单抗生产量有保证 | 需筛选细胞株,需耗时耗力 | |||
酵母表达系统 | 与哺乳动物相比只能表达简单修饰的蛋白 | 毕赤酵母表达 | 甲醇诱导操作方面 | 需要时间 | |
酿酒酵母表达 | 不常用 | 不常用 | |||
昆虫表达系统 | 不常用 | ||||
原核蛋白表达系统 | 大肠杆菌表达 | 操作简单。表达量高; 易形成包涵体,蛋白活性物保证 |
|||
枯草芽 孢杆菌表达 |
不常用 |
||||
链霉菌 | 不常用 |
测,完全随机,包含所有可能(理论上),且不改变氨基酸序列。
原理:蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关,因此mRNA的5'端必须得很好翻译,最好不要有复杂的二级结构;通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列,构建克隆,挑选多个克隆,诱导表达之,SDS-PAGE电泳检测表达量的高低,挑选高表达克隆进行测序。可参考文章来设计简并序列。
CD200R1重组蛋白实验步骤:
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列,同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因,这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列,同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切,插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆(比如100-200个)到1.5ml EP管,直接诱导表达(记得带上为改造克隆菌株的对照)。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆,测序。
CD200R1重组蛋白分离纯化原则总结:
1.应尽可能利用蛋白质不同物理特性选择所用的分离纯化技术,而不是利用相同技术多次纯化;
2.不同的蛋白在性质上有很大区别,每一步纯化步骤都应当充分利用目的蛋白和杂质成分物理性质差异;
3.在纯化早期阶段要尽量减少处理体积,方便后续纯化;
4.在纯化后期阶段,再使用造价高的纯化方法,有利于纯化材料的重复使用,减少再生复杂性。
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