PriCells: 正常人包皮成纤维细胞的培养价格

提供商：PriCells

服务名称：正常人包皮成纤维细胞的培养

规格：1 KIT

PriCells: 正常人包皮成纤维细胞的培养

实验材料：

1. 细胞来源：新生儿包皮；

2. 不含Ca ²⁺和Mg ²⁺的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；

3. 0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA溶液：两者比例为1：1，用D-Hanks液配制；

4. 0.02%大豆胰蛋白酶抑制剂：用DMEM培养液配制；

5. 生长基质：人纤维连接蛋白，按10μg/cm ²包被培养皿；

6. DMEM培养液：DMEM培养基，加10%胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml；

7. DMF培养液：为无血清化学限定性培养液。基础培养基为1：1的DMEM和Ham F12混合培养基，加入EGF100ng/ml、胰岛素100 ng/ml、转帖蛋白μg/ml、凝血酶1μg/ml、抗坏血酸10μg/ml、氢化可的松5×10 ^-5mol/ml、卵清蛋白1mg/ml和微量元素。添加青霉素100 IU/ml、链霉素100μg/ml；

8. 无菌消毒手术器械、35mm培养皿、三角瓶、100目网筛；

9. 离心管（15ml、50ml）

实验方法：

1. 分离表皮和真皮；

1）在无菌条件下取新生儿包皮，用生理盐水洗净皮片上的血迹；

2）将皮片放入盛有0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA溶液的三角瓶中，密封后存放于4℃冰箱中18h；

3）转移皮片至培养皿中，小心分离表皮层并弃之；

4）用DMEM清洗真皮片，备用；

2. 制备细胞悬液；

1）充分剪碎真皮片，加入胶原酶溶液，于37℃孵育1h；

2）用吸管反复吹打组织块，分散细胞；

3）经100目筛网过滤消化液，收集滤过的细胞悬液；

4）离心细胞悬液（800r/min，5min），弃上清液；

5）用DMEM培养液将沉淀的细胞团制成细胞悬液；

6）细胞计数，调整细胞密度；

3. 有血清培养：原代细胞和传代后的1—3代细胞用10%胎牛血清的DMEM培养液维持培养；

1）以5×10 ^-5个/ml的密度将细胞接种于培养瓶中。于37℃、5%CO ₂培养箱内培养。每2—3d换液一次；

2）原代培养至成纤维细胞汇合成单层后，按常规方法传代；

4. 无血清培养：用DMF培养液支持已建立细胞系的包皮成纤维细胞的生长和增长；

1）取在含血清条件下已生长汇合成片的培养物，弃培养液。用PBS清洗3次，尽量除去残留血清；

2）用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA溶液消化分散细胞。在镜下观察到细胞变圆后，加入大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化；

3）加入DMF培养液，用吸管吹打分散细胞。调整细胞密度；

4）取已包被人纤维连接蛋白的35mm培养皿，每皿接种5×10 ⁴个细胞。于37℃、5%CO ₂的培养箱内培养。每2—3d换液一次；

5）细胞长满基质表面后，按常规方法传代；

PriCells提供：

1. 各种原代细胞特制基础培养基；

2. 各种原代细胞培养特制添加剂；

3. 原代细胞分离试剂盒；

4. 原代细胞鉴定试剂盒；

5. 各种原代细胞DNA；

6. 各种原代细胞RNA；

7. 各种原代细胞蛋白质；

武汉原生原代生物医药科技有限公司（原生原代，PriCells）于2009年成立。位于湖北省武汉市东湖高新技术开发区东湖国家自主创新示范区域，总部设立在武汉国家生物产业基地（即光谷生物城——光谷智慧健康园。

作为中国专业的、专注的研发--生产--销售多种属组织源性细胞产品和提供细胞检测技术服务的生物医药企业，率先独立起草和制定了“基于多种属组织源性细胞分离、培养、运输和检测的PriCells技术流程”的行业专业标准，已被国际权威学术机构认可，被中国的学术机构和企业单位广泛应用。研发和生产的细胞产品主要面向科研院所、生物技术公司、制药企业研发中心和临床医疗机构。

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