增强型贴壁试剂试验说明书

增强型贴壁试剂试验说明书

价格: ¥600

品牌:细工生物

货号:CAT:C028

收藏

产品详情

相关推荐

运输方式 :4

英文名 :Enhanced cell adhesion kit-3(ECAK-3)

库存 :1000

规格 :1ml

增强型细胞贴壁试剂使用说明书 产品简介:
尽管各种细胞培养耗材都经过一定程度的处理,能够支持绝大部分贴壁细胞的培养,但有一些细胞需贴壁培养但又较难贴壁,需经过贴壁处理方能实现贴壁培养如鸡肝癌细胞系LMH等;还有一些细胞如293T等本身贴壁丌紧造成后续试验过程如转染和/或病毒感染等由于培养时间较长造成细胞容易脱落。这些问题一直困扰着从事相关研究的广大科研工作者。本试剂经过多种配方反复试验优化,采用细胞培养级别的无机盐类,多种合成的高纯度小分子蛋白以及多种保护剂等十几种成分配制而成,具有操作简单,处理后细胞贴壁紧,丌易脱落以及对细胞无毒等优点。

备注:
替代常用方法推荐:Fibronectin包被、明胶铺板、 细胞培养器材 、组织工程、 Transwell侵袭实验(促贴壁部分,营养部分不包含) 、用FN包被培养板、 Matrigel的包被(促贴壁部分,营养部分不包含) 、多聚赖氨酸包被培养板、 胶原I型蛋白预包被培养板 培养板的包被 、 人纤连蛋白包被培养板、 用293T细胞包被talen慢病毒、 细胞培养材料等用户一起完成相关实验难题。
不建议用的用户:
国产试剂耗材培养的细胞,细胞来源不明的我们暂时不建议用,因血清质量引起的细胞不贴壁不适合我们产品

 
增强型细胞贴壁试剂与其他的试剂如明胶,Fibronectin,多聚赖氨酸等有何不同
明胶,多聚赖氨酸与这俩试剂不同是我们产品操作简单,毒性很小。已有几株细胞已做实验,完全颠覆ATCC明胶方案

Fibronectin好用的价格非常高,我们优势很大。
微载体的包被,实验已做,又需要图片的可邮件联系

解决LMH细胞大规模培养过程中细胞难贴壁,增值慢,易聚团等问题,利用独特贴壁试剂,配合优化培养方法,使细胞3-5小时可贴壁生长,36-48小时可传代培养,细胞贴壁培养维持时间长,长满后可维持7天,仍保持良好细胞形态。4型腺病毒增殖滴度高,TCID50可达8.0以上。疫苗免疫效果确切,免疫组100%保护,对照组攻毒后全部死亡,剖检后出现典型心包积液-肝炎综合症症状。

LMH细胞完成60-70代细胞培养,细胞复苏生长无任何衰减变化。其他试剂相关性及无血清的相关性,好的培养试剂选择,使细胞无退化达到百分之百传代,无血清暂时不能替代有血清方案,建议各种无血清方案细胞用有血清方案保种,例如:cho sf9 sf21 等。
2018细胞验证:lncap(成瘤实验已完成,文章已发,A172,293T共聚焦实验,jurkat转染前贴壁驯化。LMH细胞150代以上无变化,后续实验无影响)
2019细胞验证:LMH细胞传喉实验TCID50六点零以上,神经类细胞系,干细胞贴壁生长。悬浮细胞转染驯化成贴壁细胞实验中。
案例:LNCAP细胞培养优势很大,替代国外包被培养板完全可以。工业应用案例见附件,国外期刊六月份可查询并引用
文章标注,
BeiJing XiGong biological technology co., LTD
Enhanced cell adhesion kit-3(ECAK-3)
CAT:C028

后续售后服务跟踪及产品销售服务完整,欢迎位老师来信沟通实验细节。

20200915更新说明: Transwell侵袭实验\Matrigel的包被(促贴壁部分,营养部分不包含)
经两年时间产品推出后与用户使用情况统计与总结:1ml的试剂可稀释到10ml-50ml方案都有很好的效果。推荐我司原装进口PBS稀释。后续用户提出稀释要求的,我们可配齐所用这个进口的PBS即用型试剂。
案例细胞图片(产品资料)两个293案例细胞腺病毒感染后滴度相差十倍以上。
细胞工厂应用用户可讨论培养中细节部分,我们常年统计使用中常见问题。

20200919更新统计应用补充:案例几株细胞经几年培养统计应用后总结,细胞复苏步骤该试剂有促进细胞着床后,有利于细胞增殖生长。陆续会用案例细胞列出。
促贴壁后,单克隆,荧光细胞筛选也有促进作用。


20201110更新统计应用补充:复苏细胞时着床时间更快,准备应用几株有名难养细胞,BEAS2B,INS-1,HK-2,THLE-3等原代, 都有着床不牢特性。ATCC来源,细胞生长不顺利关键时间段,可分出少量细胞测试。类似案例细胞,来信询问。成功救助用户基因敲除鼠来源MEF珍贵株。


20201120更新统计应用补充:北京通过赠送好质量293FT,HELA两株,统计实验室培养习惯对细胞影响,试剂部分不说了,技术部分,不充分理解消化细胞胰酶化学作用,避免机械力对细胞损伤,就是试剂较好,吹打细胞后,细胞破碎后,存活剩下都是个头较小的细胞,这些习惯养下来的细胞,后续转染,病毒包装,感染等实验结果逐年下降。且很多实验室后续实验都有较的固定步骤,影响最终实验效果,欢迎与各位新手,讨论,传代后消化等细节步骤,邮箱或加我威信联系,注明:消化步骤讨论。

20201201更新统计应用补充:耐药株筛选中应用,避免细胞加药后漂,节省了时间,增加IC50可行行(加药前细胞状态调整很重要,欢迎讨论,告知详情后,胰酶与促贴壁可送试用)
简单阐述:药浓度,大剂量浓度,最低浓度,梯度拉出,中间任意浓度组,加药三遍筛选,传代后能存活细胞肯定是耐药株。如需单克隆,等细胞集落后,加琼脂固定细胞后,打孔器打出目的细胞。

20201210 救助珍贵基因编辑鼠来源MEF一株

20210104 免疫荧光应用,细胞舒展度好,细胞组成器件清晰,细胞经得住折腾,成像设备较新的实验室欢迎使用,

20210630
细胞促锚着应用:耐药株筛选、反复加药、冻存复苏。救助细胞、共聚焦、293系列特性,SV40转染半悬浮半贴壁特性或较难养细胞,原代上皮筛选后替代胶原、神经类原代类细胞系类替代黏连蛋白、蛋白高产含血清细胞工厂方案已有工业应用。
案例:293促贴壁与不加,低浓度胰酶消化时间相差20分钟。可根据稀释不同浓度梯度,筛选出实验目的要求贴壁力度。低浓度长期促贴壁使用后,细胞趋势向好,进口试剂耗材
长期传代后有做细胞核型分析用户来信告知,免疫悬浮或做凋亡用户有这方面试验要求可讨论,反向细胞驯化我们已有些理论,案例还不是很多。正规细胞库老师要有时间测试,产品全部免费测试,无数量限制。

20211013:免疫细胞、原代细胞转染逆转录病毒,在我们促贴壁试剂新的应用开发,效果上有明显技术上有突破,POTOCOL还在优化中,关键问题点可讨论

20210910:耐药筛选重点,带药传,应用耐药株类筛选同理,简单易行,开始承接293稳定株克隆筛选试运营,时间短(14天完成G418筛选800ug/ml图一是单克隆生长扩增)
我们优势应该在冻存后复苏细胞锚着,促贴壁优势更大,转染试剂功劳也不小,图四是转染效率很高后,G418加药后活死细胞呈现。
技术讨论详细资料要先告知,各个细节。
原代上皮建系是最后目的。备注:G418浓度根据自己细胞状态筛出。

筛选抗生素
G418, Geneticin
Zeocin
嘌呤霉素
Blasticidin
Hygromycin B
上述尽量用大厂家的,其他牌子建议关注以下这几个参数(与大厂家比较下,避免条件不一影响后续实验)
Purity (HPLC)
Potency claimed (µg/mg)声称效价(微克/毫克)
Potency upon retest (µg/mg)重新测试后的效力(微克/毫克
ED50 Assay (µg/ml)ED50测定(微克/毫升)

转染前状态调整
90%的细胞——使用台盼蓝染色可轻松测定细胞活性。
转然前我们推荐Optimized Trypsin优势不是一般的大
在无DNA/RNA酶的水或TE中稀释DNA。
浓缩DNA
建议细胞铺成2种不同的密度,以确保较高的转染效率
DNA最早可以提前2小时制备,但不要太早,转染当天,将细胞铺板,转染时,细胞密度保持在汇合率为70–90%
等体积稀释的转染试剂和DNA溶液等体积混在一起后,通过缓慢地上下吹打来混合溶液,也可轻弹试管底部,或者快速涡旋混合
将复合物滴加到培养基上,然后轻轻地晃动板子。 切勿剧烈地将孔中的脂质体/DNA复合物分散,否则会使细胞移位。利用含GFP或LacZ之类报告基因的质粒作为阳性对照,评估转染效率。

293T与FT有抗性,不适合上述筛选,293适合

20211101:也欢迎与生物类产品生产有GMP资质北京附近公司洽谈合作,目前应用案例有中试生产相关蛋白用户(在冻干保护剂遇到瓶颈,也欢迎与国内冻干保护剂研发生产相关相关合作提携-相关研究技术老师欢迎加盟-国外这个技术相当成熟-我们上游工艺已经有不错的成绩,蛋白生产出来只能负二十保存,挺尴尬的)

20221013:救助G418筛选HUH7株,复苏后细胞不锚着,该试剂上后救助成功,该类耐药株救助分析,加药后细胞损伤大,与常规生长差别很大(加药后易成片,成团-也因详细统计过这类细胞特性,上皮,上皮样类,胶质类生长特性,都有这类特性,统计方法是冻存前解决这类生长特性,复苏后细胞成活率很说明问题,后续该类解决方法在转染前优化细胞调整也有明显提高转染效率,总之都是解决这类成团成片特性后提升细胞质量有明显改善)建议老师在做耐药株时保种参考,成团成片类细胞:HEPG2,THP-1,RAW264.7,JURKAT,淋巴瘤类,BV2,SV40-大T抗原转染建系,国内目前建系实验室很多,关于建系各方面都可讨论,离体处理,培养(添加因子,促锚着),转染-试剂为主(原代,干细胞,免疫类难转染问题统计),保种等。了解免疫细胞转染感染需细胞,蛋白锚着的可来信讨论。

20221111原代关键词可讨论统计中:
离体保存消化处理:设备+试剂+统计经验讨论
细胞质嗜弱碱性:培养基选定技术、文献、经验等综合考量讨论(无血清成熟株、难养株统计)。
贴壁:胶原、明胶、多聚类,Matrigel基质胶、促贴壁试剂等结合成团成片问题讨论实验目的不同的细工统计后参考。
气相流式在原代中筛选后统计开始,常规液相流式筛选后建系目的救助开始统计。


20230318类器官应用效果不错,配合压力,机械力研究细胞相关实验比较有优势,出口案例增多,国外用户价格暂定600元,干冰费用较高,路途较远。为保证品质,运输温度较严格。


20230319 间充质细胞应用,建议种子库评价的,我们可参与提供试用,该类产品建议只与进口品牌品评测比较。各种实验要求可讨论。 建议评测代数来比较,细胞质量突出,是为后面实验提供高质量细胞更优方案。


20230412
增强贴壁试剂处理难转细胞方法参考
(原代免疫类、原代正常类、胶质类、)
促贴壁处理培养板PBS清洗后
1. 逆转录病毒保存液 (-80 ℃) 于37 ℃水浴融解。
2. 将病毒液加入包被后的24孔板,每孔300 μl。
3. 32 ℃放置4小时。
4. 吸出病毒保存液。
5. 每孔加入待转染的细胞悬液400 μl (通常细胞浓度为1 × 105/ml) 。
DNA,RNA转染用户,建议用量配比参考GIBCO-POTOCOL后,在优化。需POTOCOL来信告知。
试用发送中,使用要求,培养体系全部进口(最好是GIBCO体系,细胞可以正常传代成功率高)截止到2023年10月1日,实验满意尽量付款,成本太高了,申请邮箱procyte@126.com
告知细胞详情(离体后处理我们有相关总结,可讨论细节)
国外用户运输成本较高,价格暂定600元。

20230720: 高滴度科研、生产是我司目前比较成熟了,应用同理细胞案例可行性高,平稳,易重复,核心是最基础的细胞状态与质量,加辅助相关试剂及细胞维持培养结合,我司开始重点案例源头细胞质量评价、技术方法、试剂、全方位配合用户完成目标高滴度需求。
细胞:293FT(对细胞要求高的用户可注明,共享ATCC直接来源该株细胞,血清及促贴壁试剂用户免费共享),技术储备预判,滴度达到常规参数50倍,争取百倍。
培养体系:细工提供全部试剂,备份体系还有THERMO,协和细胞库培养体系。三个厂家方案保种验证目的,也是为工业用户国产体系备份提供相关验证细胞验证参数。
偷偷讨论哈:无血清研发我们优势很大,各种成份细节都可长期验证,争取拿到最牛技术核心。含血清基础技术储备充足。也是我们优势。(上述都是含血清方案)

高滴度案例细胞讨论:原代建系肝各种POTOCOL中难点都可讨论,建议上手鼠、鸡、鸭比较容易可行,

后续进口难养类细胞做些相关经验储备:这节验证后,案例细胞是THLE-2。THLE-3正常肝细胞系。正常系难点问题都可讨论,我们并统计。

20240415: 噬斑工业应用案例参考: 有时候不是分离不到病毒,是细胞维持培养时间不够,特别是难分离,新的病毒,热点应用等,从零到一是重中之重。细胞维持培养是关键,经五年腺病毒、溶瘤病毒,细胞种子库级别试剂,细胞工厂应用等相关技术储备冗余工业试剂提供商应用特点,我们促贴壁起到关键作用。
案例细胞:LMH,维持培养第十天出现噬斑,用户已完成单克隆保种,有相关需求用户要深入讨论难点,建议试剂耗材,厂家型号,培养特点,目的要求,告知详情,我们们给出参考建议,有国外疫苗生产商用户的商家,我们可送试用及解决方案。也可做第三方验证。细胞工厂含血清方案为基础。

北京细工商贸中心

实名认证

金牌会员

入驻年限:6年

联系人:张洪印

地址:北京

电话联系

购买咨询

换一个