产品详情
文献和实验
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保存条件 :-20℃
保质期 :半年
英文名 :pUC18
库存 :200
供应商 :沪震生物
规格 :5ug
pUC18
产品信息
产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
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HZ0491 | pUC18 | 20μl |
¥请询价 |
使用说明
沪震质粒平台的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证,如存在质量问题,请在收到产品的三个月内通知我司。收到质粒后请短暂离心,取2μl转化至对应感受态中,挑取单克隆重新提取质粒后使用。
基本信息
启动子: | Lac/lac |
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复制子: | ColE1 ori |
质粒分类: | 大肠杆菌载体;克隆质粒 |
质粒大小: | 2686bp |
质粒标签: | LacZ |
原核抗性: | 氨苄青霉素Amp |
克隆菌株: | DH5α |
培养条件: | 37℃,有氧,LB |
5'测序引物: | M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT |
3'测序引物: | M13R:CAGGAAACAGCTATGACC |
质粒简介
pUC18是适合于双脱氧法DNA测序的载体,通常运用于重组dna的分子克隆中,首先我们制备大肠杆菌的感受态细胞(能接受外来重组的dna),这种感受态菌株必须不同外来DNA分子发生遗传重组,通常是rec基因缺陷型的突变体,同时它们必须是限制系统缺陷或限制与修饰系统均缺陷的菌株,即具有这三种缺陷(rk mk rec ),同时对氨苄青霉素敏感(ap)。
puc18载体自身带有抗氨苄青霉素基因,而外源片段不具有,这样只有带有puc18的转化子的菌株才能在氨苄青霉素平板上存活,而外源片段自身环化的不能存活,这称为抗性筛选。
pUC18 上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N 端146 个氨基酸的编码序列,在这个编码区中插有一个多克隆位点,且不影响正常功能,DH5α感受态菌株带有β-半乳糖苷酶C 端部分序列的编码信息,当puc18载体在正常情况下同感受态菌株融合后,互补表达有活性的β-半乳糖苷酶,称为α-互补现象,当有外源片段插入多克隆位点后,不能产生互补,即细菌不能产生β-半乳糖苷酶活性。在呈色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷酶)和诱导物IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)的存在下,互补产物菌落呈现蓝色,不互补产物菌落呈白色,很容易鉴别,这种筛选方法称为α-互补现象筛选(蓝白斑筛选)。由上可见,puc18载体除了能重组导入外源片段外,在筛选表达过程中还具有重要的作用
质粒图谱
上海沪震实业有限公司
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