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文献和实验
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供应商 :上海沪震生物科技有限公司
RNA干扰回复实验套餐
服务简介:
RNA干扰回复实验,主要是为了说明Off-target效应。
Off-target effects(脱靶效应)最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出(Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can lnduce Toxic Phenotype." RNA Accepted (2006)) 。他们给细胞转染特定基因的单条siRNA后运用全基因组芯片检测技术鉴定表达上调/下调1. 5到3倍的靶基因数量。研究人员发现在这种情况下有大量的基因被非特异性的调控着。siRNA正义链和反义链与脱靶基因的互补水平有高有低,并且每条siRNA所引发的脱靶基因表达谱也不尽相同,反映了序列依靠性的脱靶效应。
简单来说,Off-target 效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径,通过microRNA途径, 其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19-23 nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用,而如果进入microRNA途径,只需要11-15 nt互补就可以产生干扰效果,这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默,造成脱靶。
如果脱靶干扰的部分基因,正好与目的基因位于同一信号通路中,或者与目的基因的生物学功能相似,那么,如果因脱靶而干扰了其它基因,亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上,可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰,或者虽然干扰了目的基因,但是并不会引起预期的细胞表型改变。
基于以上原因,自从Off-target 效应被发现并被研究者们广泛认同后,越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明,您所获得的实验结果,不是由于Off-target效应而产生的。
而“RNA干扰回复实验”无疑是最佳的选择。
客户须知:
- 进行RNA干扰回复实验前,最好先通过预实验确定目的细胞的质粒转染效率。如目的细胞的质粒转染效率大于70% ,则可采用质粒形式载体;如目的细胞的质粒转染效率低于70% ,则建议采用腺病毒。如目的细胞的质粒转染效率低于70% ,而客户坚持使用质粒形式的载体进行实验,则本公司不保证实验结果;
- Western-Blot实验中,如一抗采用国产抗体,本公司不保证一定会获得正确结果;
- 本公司保证所提供的实验数据真实、准确,但不保证实验结果一定符合客户预期;
- 默认分组为:空白细胞组、RNA干扰组、RNA干扰+过表达(MT) 组、RNA干扰+过表达(NC) 组。如需加入RNA干扰NC对照,相应实验费用另计。
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