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提供商 :上海中科新生命生物科技有限公司
——即蛋白质药物的N糖基化位点分析技术服务作为一种普遍存在的翻译后修饰,N糖基化对蛋白质的结构和功能有着重要影响,了解N糖基化修饰位点是理解蛋白质复杂多样生物功能的一个重要前提。ATP结合了蛋白质分子在溶液内的还原酶解、N糖基化肽段富集、H218O中脱糖以及高灵敏度的LC-MS检测,可对供试品的N糖基化修饰位点进行分析,明确供试品的N糖基化修饰位点,并提供相关的实验证据,包括多肽分子XICs质谱图、MS2谱图和数据分析结果等。
“抗体类药物的糖基化修饰情况是最重要的质量控制参数之一”
技术指标
本方法所检测的样品是蛋白质或多肽类供试品,测量的是N糖基化修饰的天冬酰胺所在多肽分子的分子量,测定的是该多肽分子的氨基酸序列。蛋白质或者多肽供试品既可以是固体样品,也可以是溶液样品。供试品的量应该不少于200μg,供试品如果为固体,应为蛋白质多肽冻干制品;如果供试品为液体,样品中蛋白质多肽浓度应尽可能在2mg/ml以上。
本方法检测是N糖基化修饰天冬酰胺位点和其所在多肽分子的氨基酸序列,被修饰的天冬酰胺所在序列需符合NXS/T结构(X为非脯氨酸)。质谱数据经软件MASCOT分析,鉴定肽段的significant P需小于0.05,且Mascot Score值需大于20。
N糖基化位点测定方法所使用的仪器:Thermo公司生产的高校液相串联质谱仪Q Exactive和Easy nLC1000。
案例分析
下图显示一个糖基化分析中糖基化肽段图谱(XIC of LC-MS/MS)。
图为糖基化分析中糖基化肽段图谱(XIC of LC-MS/MS)
下图为蛋白质类供试品下N糖基化位点分析的MS/MS图谱。
图为蛋白质类供试品糖基化位点分析的MS/MS图谱
Q&A
Item | Value |
Type of Search | MS/MS Ion Search |
Enzyme | Trypsin |
Mass Values | Monoisotopic |
Max Missed Cleavages | 2 |
Variable Modifications | Carbamidomethyl (C), Oxidation (M), Deamidation 180(N) |
Peptide Tolerance | 20 ppm |
MS2 Tolerance | 0.1 Da |
Fragmentation | HCD |
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