产品详情
文献和实验
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保存条件 ：见说明书
保质期 ：12月
英文名 ：/
库存 ：1
供应商 ：上海麒盟生物科技有限公司
CAS号 ：/
规格 ：kit
产品信息产品名称：猪骨髓间充质干细胞成脂分化试剂盒
货号：CHEM-200026
批号：见包装
试剂清单：
| 序号 | 名称 | 数量 | 货号 |
| A | 猪骨髓间充质干细胞成脂分化基础培养基A | 1 | CHEM-200026-A |
| B | 猪骨髓间充质干细胞成脂分化血清 | 2 | CHEM-200026-B |
| C | 双抗 | 2 | CHEM-200026-C |
| D | 胰岛素 | 2 | CHEM-200026-D |
| E | 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤 | 1 | CHEM-200026-E |
| F | 罗格列酮 | 1 | CHEM-200026-F |
| G | 地塞米松 | 1 | CHEM-200026-G |
| H | 猪骨髓间充质干细胞成脂分化基础培养基B | 1 | CHEM-200026-H |
| I | 油红O染色液（储液） | 1 | CHEM-200026-I |
| J | 明胶溶液 | 1 | CHEM-100001-J |
A、D、H、I、J液于2-8 ℃避光保存，其余溶液于-20 ℃避光保存。所有组分均需要避免反复冻融及复温，各组分在所需要的温度下有效期为1年，配制完成的完全培养基于2-8 ℃保存，有效期为1个月。
产品介绍
猪骨髓间充质干细胞（pBMSC）具有多向分化的潜能，体外在一定条件下可以诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会（ISCT）确定此三项检测指标是MSC鉴定的必检项目，目前以MSC为基础的研究报道均会对该三个指标进行鉴定。
为方便科研用户鉴定MSC的分化能力，麒盟干细胞研究中心精心优化pBMSC成脂诱导分化试剂盒，其中包括成脂诱导培养体系和鉴定所需要的染色液，让用户可以稳定有效地鉴定pBMSC的分化潜能。该试剂盒提供的实验方法为常规鉴定方法，用于鉴定pBMSC是否具有成骨分化能力。除此以外，试剂盒的诱导培养基还可用于诱导分化过程中的其他检测，如mRNA检测、lncRNA检测、microRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。但若用于免疫荧光检测需注意脂肪颗粒导致的自发荧光或遮光问题。
本产品仅适用于科研。
操作方法
实验准备
² 试剂配制：
2-8 ℃冰箱中过夜溶解B液一支。
注意：解冻后的血清有时会出现沉淀，这些沉淀不影响血清的质量，不必做过滤等处理。
诱导液A：室温融化C、E、F、G溶液各一支，将融化的溶液加入A液中，然后将B、D液加入A液中，晃动培养基使其充分混匀，配制成诱导液A。
诱导液B：将B、D液加入H液中，晃动培养基使其充分混匀，配置成诱导液B。
油红O染液（工作液）：取油红O储液，与蒸馏水以3：2的比例混合均匀，中性滤纸过滤，即配制成了油红O染液（工作液）。
注意：溶液溶解后旋涡混匀、1000 g短时离心以使溶液集中于管底。将管内溶液加入A/H液后，吸取A/H液洗涤溶液瓶两次，将洗涤液加入A/H液中。所有液体混合成诱导完全培养基后必须充分混匀，2-8 ℃保存。E液较难溶解，需提前复温，反复摇动，在加入A液前须保证完全溶解。诱导液B可在需要时现配。整个过程需无菌操作，适当以75%酒精擦拭表面。
² 培养皿处理：
加适量明胶溶液到培养器皿中，轻轻摇动使其覆盖整个培养器皿底面，室温静置30-60分钟。弃去明胶溶液，室温晾干。
注意：本试剂盒建议使用六孔板操作，每孔加明胶溶液1 ml，使用其他培养器皿时需考虑实验结果的稳定性。整个过程需在超净工作台中操作，避免污染。
² 自备试剂：
l 消化液（0.25%Trypsin-0.04%EDTA）
l 磷酸盐缓冲液（DPBS）
l pBMSC完全培养基
l 4%中性固定溶液
注意：若pBMSC完全培养基不含血清，则需要准备胰酶抑制剂。pBMSC消化极易过度，建议稀释消化液一倍，且严格控制消化时间。
操作步骤
1. 准备所需诱导分化的pBMSC，当细胞融合达85%左右时，用消化液消化细胞，并用pBMSC完全培养基重悬。
2. 按照3×104 cells/cm2的密度将细胞接种于已明胶处理的六孔板中，每孔pBMSC完全培养基2 ml，37℃、5%CO2培养箱中培养。
注意：细胞密度为该试剂盒的标准密度，若修改细胞接种密度则需要考虑实验结果的稳定性。
3. 当细胞融合达80%时，弃去原培养上清，添加诱导液A 2 ml/well，37℃、5%CO2培养箱中培养。
注意：成脂诱导后细胞易脱壁，换液时完全培养基必须经37 ℃复温。添加培养基时动作要轻柔，避免吹起细胞。
4. 诱导培养72h后弃去原培养上清，添加诱导液B2 ml/well，37℃、5%CO2培养箱中培养。
5. 诱导培养24h后弃去原培养上清，添加诱导液A 2 ml/well，37℃、5%CO2培养箱中培养。
6. 重复步骤4、5约3-5次，待细胞内出现明显脂滴时更换为诱导液B继续培养。
7. 每2天更换新鲜诱导液B，继续培养至脂滴足够大时培养结束。
注意：换液时诱导液必须经过复温，否则影响诱导效果和可能导致细胞脱壁。根据实验需要选择培养结束时间，若成脂面积过大或脂滴过大导致连成片则不利于结果的呈现，建议提前终止。
8. 诱导培养结束时，弃去培养上清，DPBS洗细胞两次，4%中性固定溶液2 ml/well室温固定细胞20分钟。
注意：培养结束时或中途可以选择其他检测方法，如基因表达检测等，若采用自己拟定的检测方法则后续方案需要自己拟定。
9. 弃去固定液，DPBS洗2次，加入油红O染液1 ml/well染色15分钟。
注意：该步骤适用于鉴定成脂能力，若出现脂滴（脂肪细胞）则会呈现红色着色。若需要得到美观的图片，则染色时间需自己掌握。
10. 弃去油红O染液，DPBS洗3次。
11. 显微镜下观察并拍照。
12. 结果判定：按照程序操作完毕，低倍镜下观察可见大面积红色着色点，20倍和40倍镜下可观察到红色球形在细胞内的情况，此红色着色球为脂滴，说明实验所用的pBMSC具有成脂能力。否则，所使用的pBMSC无成脂能力。
结果展示
相关产品
| 名称 | 货号 |
| 猪骨髓间充质干细胞成骨分化试剂盒 | CHEM-200025 |
| 猪骨髓间充质干细胞成软骨分化试剂盒 | CHEM-200027 |
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