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实验原理

通过qPCR准确进行miRNA在细胞或组织样本中的表达分析是研究miRNA功能的基础。将小片段的miRNA通过聚合酶A加尾，再通过含有通用序列的Oligo序列进行反转录，合成特异性的miRNA引物及通用引物即可对miRNA进行qPCR检测工作。

实验流程

实验结果展示

1）目的基因hsa-miR-9-1 的扩增曲线和熔解曲线；2）内参基因人 snRNA U6的扩增曲线和熔解曲线；

3）hsa-miR-9-1 在不同样本中的qPCR相对定量检测柱形图。

实验原理

DNA甲基化存在于大多数真核生物中，一般发生在CpG双核苷酸中胞嘧啶的5’UTR区，起调控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化，20%处于基因调控区的CpG岛中。BSP甲基化测序（Bisulfite Genomic Sequencing PCR）的原理通过对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理，非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成尿嘧啶，在随后的PCR反应中尿嘧啶转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不能被脱氨基，在反应完成时被保留（见下图），我们将扩增得到的PCR产物进行TA克隆测序，就可以分析甲基化发生的具体情况。该方法实验结果准确性高，是甲基化检测的金标准。

实验流程

实验结果展示

图1 三样本的甲基化结果圈点图分析

注：图中有三个样本，每个样本含5个克隆测序结果，共计15个测序结果。每个圆圈代表一个CG位点，黑圈代表甲基化，白圈代表未甲基化；每一行代表一个样本TA克隆的一个测序结果，序列中所有的CG位点情况可被被罗列，此例序列中共含有31个CG位点。

实验原理

单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNP）是指基因组上单个核苷酸的变异，人类基因组平均每1000个就有一个SNP。它是由基因组DNA某一特定核苷酸位置上单个碱基的转换、颠换、插入或缺失引起的点突变，使得群体之间和个体之间产生了差异。其中转换和颠换发生频率较高，转换是指同型碱基之间的转换，即嘌呤与嘌呤、嘧啶与嘧啶间；颠换是指发生在嘌呤与嘧啶之间的替换。事实上转换的发生频率占多数，且CG序列上出现的SNP最为频繁，而且多是C转换为T，原因是CG中的C常因为甲基化自发地脱氨基后即成为胸腺嘧啶。

实验流程

实验结果展示

图1 目的基因 SNP 测序结果